高尿酸血症和痛风患者的发病率逐渐增加,并且市场上暂无新的治疗药物,尿酸转运蛋白1（urate transporter 1,URAT1）抑制剂作为治疗高尿酸血症和痛风的非常有前景的一类促尿酸排泄药物,其体外活性筛选一直以来均采用放射性标记底物尿酸法。另一方面,荧光探针近几年被广泛应用,尤其以荧光物质作为底物用于体外筛选化合物已成为发展趋势和研究热点。因此,基于经济成本,环境保护,操作便利等因素,开发以荧光小分子作为底物的荧光检测法用于体外筛选URAT1抑制剂是目前加速开发新型的URAT1抑制剂的迫切需求之一。在本论文中,我们主要完成了三个工作:1)、建立了稳定高表达h URAT1的HEK293T细胞系,选择蛋白表达含量最高的HEK293T/h URAT1.3细胞进行方法学建立;2)、通过HEK293T/h URAT1.3细胞和HEK293T-WT细胞对4种荧光小分子的摄取差异选择6-羧基荧光素作为底物,通过动力学研究表明URAT1介导的6-羧基荧光素转运具有时间依赖性且可饱和（Km=239.478μM,Vmax=6.211 pmol/well/min）,基于以上参数确定了以6-羧基荧光素为底物的基于荧光法的URAT1抑制剂体外评价方法。使用已上市的三种URAT1抑制剂进行方法学验证,表明该方法学具有可行性;3)、应用该方法进行了26个化合物的体外活性测试,化合物4(IC₅₀=36.11±6.56μM),9(IC₅₀=10.82±5.50μM)的抑制活性与苯溴马隆(IC₅₀=14.25±4.96μM)相当（P>0.5）,同时化合物9对XOR的抑制活性与非布索坦相当（P>0.5）,提示化合物9可能是一个双靶点抑制剂。以荧光小分子作为URAT1底物用于进行体外活性测试不仅可以实现低成本,环保,还可以进行快速高通量的筛选,促进开发新型的URAT1抑制剂,加速抗高尿酸血症和痛风药物的发展进程。