以植物为主要来源的中草药是我们中华民族的传统瑰宝,在科学技术飞速发展的今天,实现中药现代化已经成为振兴传统医学的有效途径之一。中药现代化就是将传统中医药的优势、特色与现代化科学技术相结合,采用现代科学技术手段研究中草药,阐明其本质,从而使人们及时用上安全性更高、疗效更好、质量更稳定、使用更方便的中药,造福全人类。以中草药库为基础,针对特异性靶体的高通量药物筛选对于阐明中草药的作用本质具有重要的意义。本文以实验室拥有的中草药天然化合物库为基础,选择特异性靶体——组胺3型受体,建立以组胺3型受体为靶点的功能性检测细胞模型,并将其应用于高通量药物筛选的平台中,筛选组胺3型受体的特异性配体。组胺3型受体属于Gi类型的G蛋白偶联受体(GPCR),我们应用嵌合G蛋白(Promiscous G protein)–G15将其信号传导通路转变为Gq类型,以便于利用检测细胞内钙离子浓度变化的检测方法建立高通量的功能性筛选平台。我们首先,在HEK293细胞系中稳定转染了G15基因,通过瞬时转染H3R基因检测并挑选可稳定表达G15的细胞克隆。然后,以信噪比最高的G15克隆为母细胞,稳定转染H3R基因,最终构建完成可用于高通量药物筛选的组胺3型受体细胞模型。为检测该细胞模型的稳定性与特异性,我们检测了组胺3型受体的天然激动剂组胺和组胺3型受体特异性的拮抗剂对该细胞模型的作用,以及不同类型组胺受体的特异性激动剂和拮抗剂对该细胞模型的作用,实验证明组胺3型受体特异性的激动剂和拮抗剂能够引起组胺3型受体细胞模型的钙离子信号的变化,而非特异性的激动剂和拮抗剂则无此作用。另外,我们还检测了该细胞模型最佳检测用细胞密度、溶剂中不同DMSO浓度对检测的影响效应、冻存前后的稳定性、不同拮抗剂加入时间的比较及支原体检测等。研究证明,我们建立的组胺3型受体细胞模型可以稳定、高效的表达组胺3型受体,可应用于以组胺3型受体为靶点的高通量药物筛选中。以本实验室已有的天然产物库为基础,我们利用组胺3型受体细胞模型筛选了18种中草药,264个分离组分(Fraction)。第一轮筛选的阳性率达25%,第二轮筛选重复初次筛选得到的阳性组分,结果表明这些阳性组分均对G15母细胞系有作用,因此这些组分可能是假阳性。本次针对组胺3型受体的高通量药物筛选的探索结果表