PDLSCs因具有较强的自我更新和多向分化能力而被广泛应用于牙周组织再生中，为了获得更好的再生效果，尤其是在牙周病微环境下，PDLSCs多向分化潜能会受到不利的影响而发生降低，众多学者纷纷着眼于如何优化PDLSCs的生物学特性。DFCs是牙周组织中的间充质干细胞，也是一种发育期的前体细胞，以往很多研究主要集中于DFCs的多向分化潜能。鉴于共培养的方式可以模拟体内微环境，促进两种细胞间的相互作用，而DFCs和PDLSCs在牙齿发育过程中具有十分密切的关系，本实验设立DFCs和H/PPDLSCs的共培养体系，假设DFCs能够提供一种良好的微环境，使处于其中的H/PPDLSCs的生物学特性得到优化，以期获得更好的牙周再生效果。实验分为三部分：1. DFCs、H/PPDLSCs的培养、鉴定及共培养系统的建立目的：获得实验所需的三种细胞，并分别建立DFCs和HPDLSCs、PPDLSCs的共培养体系。方法：分别从健康牙周组织和牙周病患者的牙周组织获得HPDLSCs和PPDLSCs，从青少年处于牙胚状态的智齿获得DFCs，对三种细胞进行原代培养，纯化后采用流式细胞术进行间充质干细胞表面标记物的鉴定，并利用克隆形成实验和成骨成脂实验对HPDLSCs和PPDLSCs进行增殖和多向分化能力的鉴定；最后利用transwell小室建立DFCs和HPDLSCs、PPDLSCs的共培养系统。结果：健康以及患牙周病的牙周组织均可以获得PDLSCs，青少年牙囊组织可以获得DFCs。这三种细胞CD146、CD105、CD90、CD29均呈强阳性表达，而CD45呈阴性表达，说明本实验获得的HPDLSCs、PPDLSCs及DFCs为间充质来源的干细胞；增殖分化实验提示PPDLSCs较HPDLSCs克隆形成能力强，而成骨成脂能力弱，提示牙周病的不利微环境影响了PDLSCs的功能；共培养系统中DFCs和PDLSCs生长良好，共培养系统得以成功建立，为后续实验奠定了基础。2. DFCs对H/PPDLSCs自我更新能力的影响目的：探索DFCs对HPDLSCs、PPDLSCs的自我更新能力（包括干性和增殖能力）的影响。方法：在共培养系统建立后，利用Real Time RT-PCR检测下层PDLSCs干性相关基因Sox2、Oct4、Klf4的表达；利用克隆形成实验和细胞周期实验检测与DFCs共培养后HPDLSCs、PPDLSCs的克隆形成率的变化和细胞周期中处于G2+S期的细胞百分比的改变。结果：在与DFCs共培养后，HPDLSCs、PPDLSCs中Sox2、Oct4、Klf4的基因水平均发生明显上调；克隆形成率也得到了很大程度的增加；而细胞周期结果显示HPDLSCs和PPDLSCs中处于G2+S期的细胞百分比显著增多；其中PPDLSCs各项指标上调幅度明显高于HPDLSCs。结论：与DFCs共培养不同程度的增加了HPDLSCs、PPDLSCs的自我更新能力。3. DFCs对H/PPDLSCs多向分化能力的影响目的：评估与DFCs共培养之后对HPDLSCs、PPDLSCs的多向分化能力（包括成骨、成脂能力）的影响。方法：在建立与DFCs的共培养系统后分别对其进行成骨成脂诱导实验，诱导后进行ALP染色和ALP活性检测观察共培养后HPDLSCs、PPDLSCs的ALP活性的改变；利用Real Time RT-PCR检测成骨基因Runx2、OCN、ALP的表达和成脂基因PPARγ的表达；采用Western Blot检测Runx2蛋白水平的变化；对共培养后HPDLSCs、PPDLSCs分别进行茜素红染色和油红O染色以观察矿化结节和脂滴的形成情况。结果：在与DFCs共培养后HPDLSCs、PPDLSCs的ALP活性均得到明显增强；Runx2、OCN、ALP、PPARγ基因水平也发生了大幅上调，Runx2蛋白变化趋势与基因结果一致；茜素红和油红O染色结果显示DFCs增加了HPDLSCs、PPDLSCs形成矿化结节和脂滴的数量；PPDLSCs的成骨成脂能力上调幅度显著高于HPDLSCs。结论：DFCs从不同程度优化了HPDLSCs、PPDLSCs的成骨成脂分化能力。综上所述，DFCs作为一种牙周组织来源的间充质干细胞和发育期的前体细胞，可以提供一种良好的微环境并发挥其优化调节作用，优化HPDLSCs的自我更新和多向分化潜能，恢复PPDLSCs因炎症而下降的生物学功能，为利用H/PPDLSCs进行的牙周再生奠定良好的基础。