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本课题就低剂量辐射(LDR)诱导蛋白的产生条件、提取、检测、生物活性等进行了初步的实验研究,并进一步探讨了其对淋巴细胞及其亚群功能的影响。 雄性昆明小鼠给予5-10cGyLDR(γ射线)全身照射后2h,取脾脏制成单细胞悬液,超声波破碎细胞、低温高速离心,上清液即为LDR诱导蛋白粗提液。以3H-TdR掺入法,观察LDR诱导蛋白对离体小鼠脾脏细胞转化的刺激作用以反映其生物活性。结果表明经5-15cGyLDR(γ射线)作用后都可从小鼠脾脏细胞中提取到有生物活性的LDR诱导蛋白,并且在10cGy剂量时LDR诱导蛋白活性最强,提取诱导蛋白的最佳时间在照后2h左右。 制备的LDR诱导蛋白提取液经Sephadex G-100凝胶过滤检测时,出现新生蛋白,再经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测新生蛋白分子量,测得分子量为76.9-110.0KD,用Lowry法测定新生蛋白含量为613.33±213.42ug/3×107个脾细胞。 用3H-TdR掺入法及14C-UR,3H-Tyrosion双标记法掺入,观察LDR诱导蛋白对离体小鼠脾细胞转化的刺激作用,分别表示脾细胞转化时DNA、RNA及蛋白质的合成,结果表明;LDR诱导蛋白能增强小鼠离体脾脏细胞转化时DNA、RNA和蛋白质的合成。 用LDR诱导蛋白刺激经PHA、LPS处理的正常人外周血淋巴细胞,以14C-TdR掺入T淋巴细胞的CPM值及3H-TdR掺入B淋巴细胞的DPM值为指标观察LDR诱导蛋白对正常人外周血淋巴细胞转化的刺激作用,结果表明:LDR诱导蛋白对正常人静脉血中T、B淋巴细胞体外转化有刺激作用,表现为T、B淋巴细胞的CPM或DPM值明显增高。 观察了LDR诱导蛋白对单克隆抗体铺皿法—直接法分离出的淋巴细胞亚群CD4、CD8、CD19转化功能的影响,14C-TdR掺入结果表明LDR诱导蛋白能不同程度地刺激CD4、CD8、CD19细胞DNA合成。 用McAb直接法分离出CD57细胞和非CD57细胞(除CD57外的所 低剂B辐射诱导蛋白及其对淋巴细胞功能的彤响 摘要 有淋巴细胞)并以二者为效应细胞,K562细胞为靶细胞,将CD57与 非CD57杀伤肿瘤细胞的作用进行比较;测定计算各自的杀伤活性并 观察LDR诱导蛋白对杀伤活性的影响。结果表明CD57及非CD57细胞 均对肿瘤细胞有杀伤作用,且非CD57细胞的作用更强;LDR诱导蛋 白能分别增强CD57及非CD57体外抗肿瘤细胞效应州K细胞活性及 NK活性) 用间接免疫荧光一流式细胞仪测定方法,观察LDR诱导蛋白对人 淋巴细胞CD25分子表达的影响,结果表明LDR诱导蛋白能轻度增强 静止的淋巴细胞CD25分子的表达。 本文从分于、淋巴细胞亚群及淋巴细胞总体等不同水平,分别研 究LDR诱导蛋白的免疫增强作用,不仅初步表明LDR诱导蛋白是LDR 兴奋效应的物质基础,而且展现了对LDR诱导蛋白进行深入研究的 重要性及其临床应用的广阔前景。