DGCR8作为Drosha的主要结合蛋白,可以通过其C末端的两个双链RNA结合区域与pri-miRNA结合,招募并指导Drosha在pri-miRNA的正确位置剪切,生成pre-miRNA,pre-miRNA进一步被Dicer加工剪切,形成成熟的miRNA。DGCR8的缺失或异常表达会影响Drosha的剪切活性,进而影响mi RNA的活性,导致疾病的发生。因此,维持DGCR8的稳定对于miRNA途径十分重要。已有文章报道DGCR8的去乙酰化修饰可以增强其与pri-miRNA的亲和力及miRNA的生成,DGCR8的磷酸化修饰可以增强DGCR8的稳定性,而Drosha可以通过对DGCR8 mRNA的剪切使其蛋白减少。总体而言,目前对于DGCR8在经典miRNA生成过程中的作用机制已经研究得相对清楚,但对DGCR8在miRNA生成作用外的功能及DGCR8本身的调控研究仍不明确。成熟miRNA作为miRNA途径的唯一效应分子已被人们普遍接受,但近期Chen CZ及Kay MA课题组相继报道pri/pre-miRNA可以识别靶基因,并直接参与介导基因沉默,为miRNA途径提出了新的作用方式。我们发现DGCR8在多个位点的SUMO1修饰可以影响DGCR8与pri-miRNA的结合,进而影响pri-miRNA介导的基因沉默作用。在第一部分中,我们证实DGCR8可以发生SUMO1修饰,并被其磷酸化修饰促进。当DGCR8的主要SUMO1修饰位点K707突变为K707R之后,DGCR8蛋白的稳定性由于泛素化修饰增强而降低。同时,DGCR8-K707R会引起DGCR8与pri-miRNA的结合减少。虽然这种亲和力减弱并不影响Drosha/DGCR8微加工复合体的剪切活性及成熟miRNA的生成,却可以通过抑制pri-mi RNA直接介导的基因沉默效应而影响miRNA的功能,最终减弱细胞的克隆形成能力、迁移能力及肿瘤生成。在第二部分中,我们致力于寻找介导DGCR8发生SUMO1修饰的E3连接酶及DGCR8其它的SUMO1修饰位点和功能。我们发现DGCR8的SUMO1修饰可以被p14ARF促进;而位于DGCR8与p14ARF的结合区域的K259是DGCR8的另一主要SUMO1修饰位点。与DGCR8-K707R一致,K259R使DGCR8的稳定性及其与pri-miRNA的结合力减弱;但不同的是DGCR8-K259R可以使DGCR8由细胞核向细胞质分布,同时促进了细胞的克隆形成能力、迁移能力和肿瘤生成。