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研究背景多发性骨髓瘤(multiple myeloma, MM)是浆细胞恶性增殖性疾病,是骨髓中的浆细胞克隆性异常增生,并分泌单克隆免疫球蛋白或其片段(M蛋白),导致相关器官或组织损伤(Relative Organ or Tissue Injure, ROTI)的疾病。其常见的临床表现为贫血、骨痛、肾功能不全和感染等。美国癌症学会估计2011年美国新发MM20520例,其中男性11400例,女性9120例,死亡估计有10610例,男性患者的平均年龄是62岁(75%的患者大于70岁),女性患者的平均年龄是61岁(79%的患者大于70岁)。我国的发病高峰年龄在50～60岁,40岁以下少见,男女发病比例为3：2。在过去的十年间,MM的治疗取得了很大的进展,美国监测,流行病学和最终结果(Surveillance, Epidemiology and End Results, SEER)数据库报道多发性骨髓瘤的5年生存率已经从1975年的25%上升至2003年的34%,这主要归功于新的和更加有效的治疗方法的出现。然而无论是初始治疗还是复发后治疗,MM虽然对多种细胞毒药物敏感,但是缓解只是暂时的,现有的治疗手段仍无法治愈多发性骨髓瘤。最近几年,关于治疗MM的新药的研究不断增加,MM却仍是不可治愈的疾病。可逆性蛋白酶体抑制剂硼替佐米在MM中的研究已相对成熟,蛋白酶体抑制剂在MM中的作用也得到了肯定,然而硼替佐米价格昂贵,一般患者负担不起。而姜黄素属于具有蛋白酶体抑制剂作用的天然植物成分,且价格低廉。因此,本研究将分析姜黄素对多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞的增殖抑制作用,并初步探讨其促进RPMI8226细胞凋亡的相关机制。研究目的研究姜黄素在骨髓瘤细胞中调控癌基因及抑癌基因的表达,为姜黄素的临床应用提供更多的实验证据。姜黄素对P53蛋白表达的影响,这可能成为治疗MM潜在的作用靶点。姜黄素价廉易得,将姜黄素应用于MM的治疗中,可以提高疗效同时减轻患者的经济负担。研究方法：1.绘制生长曲线：分别用2.5μmol/L、15μmol/L、20μmol/L、40μmol/L浓度的姜黄素处理多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226,分别在0h,24h,48h,72h,96h对多发性骨髓瘤细胞计数,绘制生长曲线,观察用不同浓度姜黄素处理的RPMI8226细胞生长相对速度。2.MTT法：采用MTT法检测不同浓度姜黄素在不同时间对多发性骨髓瘤细胞RPMI8226细胞的增殖抑制作用。3. Real-time PCR:应用Real-time PCR方法检测姜黄素处理后的多发性骨髓瘤细胞的凋亡相关基因p53、bax, MDM2的表达变化。4. Elisa法：用Elisa方法检测姜黄素处理后的多发性骨髓瘤细胞RPMI8226表达P53蛋白的变化。5.统计学处理：采用SPSS17.0统计分析软件进行分析,对照组和各个实验组之间采用单样本和独立样本t检验,检验水准a=0.05,以P＜0.05表示差异有统计学意义。结果1.生长曲线示：随着姜黄素浓度的增加,多发性骨髓瘤细胞RPMI8226细胞的增殖变慢,在浓度≥15μmol/L时,细胞几乎看不到增殖。2.MTT结果示：姜黄素可抑制多发性骨髓瘤细胞RPMI8226的增殖,并且这种抑制作用呈剂量依赖性和时间依赖性,各实验组与对照组OD值的差异有统计学意义(P<0.05)。3. Real-time PCR:姜黄素处理后的多发性骨髓瘤细胞RPMI8226,p53, box基因表达上调,MDM2基因表达下调,实验组与对照组表达差异显著,有统计学意义(P<0.05)。4. Elisa法结果显示：用10μmol/L和15μmo1/L姜黄素处理多发性骨髓瘤细胞RPMI8226细胞48h后,P53蛋白表达水平上升,且15μmol/L姜黄素实验组的P53蛋白表达高于10μmol/L姜黄素实验组的P53蛋白表达水平。实验组与对照组P53蛋白的表达差异显著,有统计学意义(P<0.05)。结论1.在一定的浓度范围之内,姜黄素对多发性骨髓瘤细胞系RPMI8226细胞的生长具有抑制作用,并且该抑制作用具有剂量依赖性和时间依赖性；2.经过姜黄素处理的骨髓瘤细胞RPMI8226, p53基因及P53蛋白表达上调,姜黄素可能通过p53途径,上调P53蛋白表达促进骨髓瘤细胞凋亡。