为了探讨魏斯氏菌在辣白菜中起的作用和获得与明串珠菌相关乳酸细菌的质粒,并对质粒进行初步研究,故分离获得魏斯氏菌。 　　本课题是以辣白菜发酵汁为原料。首先通过形态特征筛选出疑似魏斯氏菌,再通过生长特性、生理生化检测对该菌进行初步鉴定。该菌表现出的形态为短杆状,一头较窄一头较宽,经革兰氏染色显示为紫色。在37°C生长,2°C弱生长,能承受3%的NaCl,而不能承受6.5%的NaCl浓度,过氧化氢酶阴性,能够水解精氨酸和七叶苷,能够产生葡聚糖,并且经葡萄糖发酵产酸产气。综合上述特性,参照《乳酸细菌分类鉴定及实验方法》和《伯杰细菌鉴定手册》初步确定为魏斯氏菌。为了确定该魏斯氏菌的分类地位,本课题又做了16S rDNA的序列分析,构建了魏斯氏菌的系统发育树,进行了16S rDNA序列的同源比对,确定该菌为Weissella cibaria。将其命名为kimshi006,其16S rDNA在NCBI上的登录号为HM369807。 　　为了进一步了解该魏斯氏菌,本课题对魏斯氏菌的质粒进行了提取。由于魏斯氏菌质粒的拷贝数并不多,并且在提取过程中杂质很多,用经典的碱裂解法不能获得质粒。本课题根据魏斯氏菌的特性,改进了碱裂解法,提取出魏斯氏菌质粒,通过电泳观察到其有大小两种质粒。将小质粒连接 pUC19,转化大肠杆菌DH5α。将重组菌送到公司测序,获得魏斯氏菌小质粒序列,并对质粒序列进行了初步分析。 　　本课题的研究意义在于从辣白菜中分离、筛选魏斯氏菌菌株,为中国内地首次分离获得魏斯氏菌。对其生理特性进行研究,获得魏斯氏菌最佳培养条件和方法,为其商业化发酵剂的制备供理论和技术依据。首次分离提取了魏斯氏菌质粒,了解质粒的大小和序列情况,研究质粒的生化特性和可能具有的功能,研究其复制起点,为构造明串珠菌属的穿梭质粒打下基础。