目的：　　 1、探讨EpCAM在肝细胞肝癌中的表达及与临床病理特征的相关性及其与患者预后的关系；　　 2、EpCAM基因敲除肝癌细胞系的构建及鉴定；　　 3、EpCAM的下调对肝癌细胞多种恶性表型尤其是浸润和转移的影响。　　 方法：　　 1、收集2005年9月至2006年11月于天津医科大学附属肿瘤医院手术切除的符合试验条件的106例肝细胞癌患者的临床病理资料，采用免疫组织化学方法检测标本中EpCAM的表达情况，分析EpCAM的表达情况与临床病理因素之间的关系，进一步进行生存分析和Logistic回归研究，分析各因素对肝癌预后预测的价值，尤其是EpCAM的表达情况与肝癌复发转移的相关性。为进一步研究EpCAM调节肝癌浸润转移提供前期工作。　　 2、RT-PCR及Western blot研究EpCAM在多种肝癌细胞系的表达，筛选EpCAM调节肝癌浸润转移机制的合适细胞系。基因重组的方法构建含有EpCAM特异性miRNA的表达载体；用构建的特异性 miRNA表达载体转染肝癌细胞，经Blasticidin筛选获得稳定表达的细胞系。　　 3、MTT试验绘制转染细胞和对照细胞的生长曲线；流式细胞术分析Hep3B/miR-EpCAM细胞的细胞周期分布发生明显变化；克隆形成试验-平板克隆形成试验和软琼脂克隆形成试验观察转染细胞和对照细胞在体外的成瘤能力；体外迁移试验、体外粘附试验、体外侵袭试验观察转染细胞和对照细胞体外的运动、粘附、侵袭能力；裸鼠体内成瘤实验观察转染细胞体内成瘤能力的变化。　　 结果：　　 1、EpCAM在肝癌组织中呈过表达；通过比较随访转移状态不同肝癌间EpCAM的表达状况发现：EpCAM在有转移复发肝癌中表达的阳性率明显高于无转移复发肝癌中EpCAM表达的阳性率；有转移复发肝癌的EpCAM免疫组化染色评分为7.11±1.32，无转移复发肝癌的免疫组化染色评分4.63±2.72(P<0.05)。在HCV、肿瘤直径、肿瘤形态和有无包膜方面的差异有统计学意义(P<0.05)。单因素分析显示：HBsAg、HCV、AFP、肝硬化程度、Edmonson分级、肿瘤直径、肿瘤形态、包膜有无、肿瘤血管侵犯及EpCAM是影响患者无瘤生存时间的危险因素。COX回归显示患者HCV、HBV、AFP、肿瘤直径、肝硬化程度、肿瘤侵犯血管及EpCAM表达情况是影响患者无瘤生存时间的独立危险因素(P<0.05)。Logistic回归显示EpCAM表达情况、肿瘤直径大小、患者肝硬化程度、肿瘤侵犯血管、HCV、HBsAg及AFP是影响患者复发/转移的独立危险因素。　　 2、Western blot结果显示，Hep3B和HepG2细胞系的EpCAM蛋白水平表达均较高，以Hep3B为最。基因重组的方法成功构建EpCAM特异的miRNA表达载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-EpCAM1、pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-EpCAM2、pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-EpCAM3和pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-EpCAM4及其阴性对照载体pcDNATM6.2-GW/EmGFP-miR-neg；经测序构建正确。将构建载体分别转染Hep3B细胞后，筛选出敲除EpCAM效果最佳的为4＃载体。通过抗生素Blasticidin筛选4w后获得稳定EpCAM表达特异降低的细胞系Hep3B/miR-EpCAM。　　 3、经过MTT实验证明EpCAM表达降低能使肝癌细胞生长速度减慢；流式细胞术分析细胞的周期分布Hep3B/miR-EpCAM细胞G1期比例和S；克隆形成试验-平板克隆形成试验和软琼脂克隆形成试验观察转染细胞和对照细胞在体外的成瘤能力；体外迁移试验、体外粘附试验、体外侵袭试验观察转染细胞和对照细胞体外的运动、粘附、侵袭能力；裸鼠体内成瘤实验观察转染细胞体内成瘤能力的变化。　　 结论：肝细胞肝癌中存在不同程度的EpCAM的表达，其表达与否是预测肝癌术后转移复发的独立危险因素；EpCAM的表达与肝癌的转移状态呈正相关。成功建立稳定EpCAM表达特异降低的细胞系Hep3B/miR-EpCAM。通过多种体外、体内实验表明EpCAM影响肝癌细胞恶性表型。