【摘 要】
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夫西地酸(Fusidic Acid,FA)是从梭链孢酸脂球菌(Fusidium coccineum fungus)的发酵液中分离得到的一种甾体类抗生素,主要具有抗革兰氏阳性菌活性。其结构与头孢菌素P1、烟曲霉酸相似,但活性更强,也是唯一一个应用于临床的梭链孢酸类抗生素。其独特的抗菌机理使其与其他抗生素几乎无交叉耐药性,应用前景广阔。当前FA主要是通过微生物发酵的方式生产,且国内外相关报道较少。本课
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夫西地酸(Fusidic Acid,FA)是从梭链孢酸脂球菌(Fusidium coccineum fungus)的发酵液中分离得到的一种甾体类抗生素,主要具有抗革兰氏阳性菌活性。其结构与头孢菌素P1、烟曲霉酸相似,但活性更强,也是唯一一个应用于临床的梭链孢酸类抗生素。其独特的抗菌机理使其与其他抗生素几乎无交叉耐药性,应用前景广阔。当前FA主要是通过微生物发酵的方式生产,且国内外相关报道较少。本课题主要通过菌种选育、发酵工艺优化研究,提高并稳定FA的产量,为FA的工业化生产奠定基础。首先通过几轮自然筛选获得了遗传性状稳定的出发菌株ZH08-15(335.5mg/L),利用蔗糖高渗筛选模型,通过紫外(UV)、亚硝基胍(NTG)诱变、常压室温等离子(ARTP)和60Co-γ射线诱变选育方法,获得了一株高产突变株ZH08-γ-17(1206.9mg/L),较出发菌株的发酵单位提高了3.60倍。为了进一步提高产量,对发酵工艺进行优化,优化后的培养条件为:斜面培养时间7d,种龄48h,接种量10%,发酵初始p H 6.5,培养温度25℃,培养天数8d。对发酵培养基的单因素实验表明,氮源对FA的产量有较大影响。通过响应曲面设计方法(Response Surface Methodology,RSM)中的Box-Behnken(BBD)设计优化发酵培养基(%)为:蔗糖14、安琪酵母YP601 1.882、大豆蛋白胨0.826、棉籽饼粉0.51、(NH4)2SO4 0.1、Mg SO4·7H2O 0.2、K2HPO4 0.15,ZH08-γ-17摇瓶的发酵单位达到1409.4mg/L,较优化前产量(1206.9mg/L)提高了16.8%。进一步进行发酵罐研究,通过调整接种量、改善溶氧和补加蔗糖,ZH08-γ-17的发酵单位达2114.1mg/L,较摇瓶发酵单位提高了40.4%。最后,通过调节发酵液p H,用乙酸乙酯萃取后旋蒸浓缩,对浓缩物进行MS验证,结果与文献报道相同,确定所得浓缩物为FA。
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