背景和目的胃癌的恶性度高,预后差,腹膜转移是其最常见、侵袭性最强的转移类型。胃癌腹膜转移的具体机制尚未完全阐明,由于缺乏有效预测指标,其诊断难度较大,且治疗手段有限,疗效欠理想。腹腔灌注化疗（IPC）是临床防治胃癌腹膜转移的有效手段,但IPC也存在治疗风险。因此,鉴别腹膜转移危险因素,寻找特异性分子标志物,对高危患者进行预防性IPC干预值得重视。在前期研究中,我们通过全外显子捕获测序（WES）,筛选出多个与胃癌腹膜转移潜在相关的基因,其中FNDC1在腹膜转移患者中突变富集,提示其可能与胃癌腹膜转移有关。本课题在此基础上,应用生信分析、基因转染、RNA干扰、动物模型和蛋白组学等手段,旨在分析FNDC1与胃癌腹膜转移的相关性并阐明其具体作用机制。方法1.利用基因表达数据库进行生物信息分析,筛选胃癌腹膜转移相关基因,将结果比对WES数据,验证FNDC1与胃癌腹膜转移的相关性。2.使用免疫组化分析74例胃癌和癌旁组织中FNDC1表达水平,解析其与胃癌患者临床资料及预后的关系。3.应用实时荧光定量PCR和免疫印迹（WB）检测人胃癌细胞株（AGS、MGC803、BGC823、HGC27）和正常胃黏膜上皮细胞GES-1中FNDC1基因的m RNA转录水平及蛋白表达情况。4.构建慢病毒介导的FNDC1基因敲减载体并进行病毒包装,转染FNDC1高表达的胃癌细胞株AGS和MGC803,并进行细胞计数试剂盒（CCK8）、细胞周期检测、侵袭迁移能力、克隆形成、Edu细胞增殖检测等细胞功能学实验,验证FNDC1在胃癌侵袭转移过程中的作用。5.通过动物实验观察FNDC1敲减对MGC803胃癌细胞裸鼠皮下成瘤能力的影响。6.构建慢病毒载体,在AGS和MGC803细胞中敲减FNDC1,并在FNDC1表达相对较低的BGC823细胞中过表达FNDC1。再分别使用胃癌细胞及移植瘤组织,通过WB和免疫共沉淀检测上皮细胞间充质转化（EMT）及Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白变化,明确FNDC1调控Wnt/β-catenin信号通路介导胃癌细胞EMT的作用。7.回复实验验证,通过慢病毒转染,在FNDC1敲减的MGC803细胞中过表达β-catenin,通过细胞克隆、划痕实验,观察其对胃癌细胞侵袭迁移的影响。结果1.通过公共数据库筛选获得FNDC1基因,生信分析显示FNDC1在胃癌及腹膜转移组织中表达上调,与胃癌患者预后不良显著相关。基因集富集分析显示FNDC1的高表达与EMT正相关。2.FNDC1表达水平与患者肿瘤大小、肿瘤分期、浸润程度、淋巴结转移及腹膜转移情况相关,并与无疾病进展生存期（DFS）和总生存期（OS）减少有关。FNDC1的表达水平和浸润程度是导致患者预后不良的独立危险因素。3.胃癌细胞中FNDC1的m RNA转录和蛋白表达水平均显著高于GES-1,其中AGS和MGC803的表达水平最高,BGC823表达水平相对较低。4.FNDC1敲减抑制了胃癌细胞AGS和MGC803的增殖、侵袭及迁移,并导致G2～M期阻滞。5.动物实验发现FNDC1敲减后MGC803的裸鼠皮下成瘤能力减弱。6.FNDC1敲减后,在胃癌细胞MGC803及移植瘤组织中均显示EMT关键蛋白E-cadherin和Krt12蛋白水平显著上调,vimentin,survivin,Snail和Slug显著下降。而过表达FNDC1,则使E-cadherin和Krt12蛋白水平显著下降,vimentin、survivin、Snail和Slug蛋白水平显著上升。7.FNDC1敲减后,胃癌细胞AGS、MGC803的总β-catenin和细胞核内β-catenin蛋白水平均显著下降,β-catenin泛素化水平显著升高。8.FNDC1敲减后,胃癌细胞的侵袭迁移能力减弱,而在FNDC1敲减的胃癌细胞株中过表达β-catenin,能够逆转这一趋势。结论FNDC1与胃癌侵袭及腹膜转移有关,其在胃癌组织和细胞中表达上调。FNDC1高表达是影响患者预后的独立危险因素。FNDC1敲减能显著抑制胃癌细胞的增殖、侵袭迁移活性、G2～M期阻滞。FNDC1可通过调控Wnt/β-catenin信号通路,诱导胃癌细胞发生EMT,促进胃癌的侵袭转移。FNDC1有可能作为胃癌腹膜转移的预测因子,也可作为胃癌腹膜转移的潜在治疗靶点进行深入研究,具一定的转化应用价值,值得进一步验证。