抗五种赤潮藻的单克隆抗体的制备和特性分析

来源 :暨南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:easy8023
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
目的:建立分泌抗海洋褐胞藻、卵圆褐胞藻、赤潮异弯藻、具齿原甲藻、尖刺拟菱形藻等五种藻的高特异性、高亲和性单克隆抗体杂交瘤细胞株。若该类细胞株所分泌的单克隆抗体结合特定藻抗原,则可利用此类单克隆抗体鉴别此五种不同的藻,从而为赤潮藻的检测、监测和防治提供有效的工具。 方法:将五种藻混合免疫Balb/c小鼠,加强免疫三次后,取血清效价高的小鼠脾脏细胞按一定的比例与SP2/0骨髓瘤细胞混合,加入PEG4000使两者融合。用HAT,HT等选择性培养基培养杂交瘤细胞,然后用间接血凝初步筛选出有抗体分泌的细胞克隆。进一步采用间接ELISA法等,用海洋褐胞藻等五种赤潮藻细胞包被96孔酶标板筛选分泌特异性单克隆抗体的克隆。扩增阳性克隆并冻存,制备腹水,测定腹水效价,用硫酸氨,protein-A等法纯化腹水型抗体。 结果:所得杂交瘤细胞融合率为37.5%。经反相间接血凝、间接ELISA法等筛选到能分泌抗藻单克隆抗体的细胞株,其中9AD2B2对海洋褐胞藻和卵圆褐胞藻的特异性高;15CA7对赤潮异弯藻和尖刺拟菱形藻的特异性高;23BG2和23BG9对赤潮异弯藻、具齿原甲藻与尖刺拟菱形藻的特异性高。而获得的M18号杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可与以上五种藻产生高效价的明显交叉反应,显示此单抗可代替五种海洋藻的抗血清。在藻最佳包被浓度时,9AD2A8腹水对五种藻的效价均可达到1:3200,23BG9E11腹水五种藻的效价可达1:1280,两种腹水主要成分均为IgG1。 结论:利用杂交瘤技术能制备出分泌抗五种藻的单克隆抗体的细胞株。该类细胞株分泌的单克隆抗体可特异性地结合到五种藻细胞上,这意味着可用此类单克隆抗体鉴定、检测这五种赤潮藻。
其他文献
目的:1.观察慢性肾衰大鼠肾脏细胞凋亡与相关基因Fas-L、Fas、Bax和Bcl-2表达及其意义.2.探讨血管紧张素转换酶抑制剂苯那普利对慢性肾衰大鼠肾脏细胞凋亡以及凋亡相关基因Fa
目的 该动物试验研究的目的有两方面:一是以荷瘤小鼠为研究对象,观察十全大补汤对肿瘤生长和对荷瘤动物淋巴细胞增殖、IL-2、IL-6及TNF的影响;二是通过环磷酰胺和氢化波泥松
背景:  冠状动脉粥样硬化性心脏病是严重威胁人类健康的重大疾病。巨噬细胞活化和泡沫细胞形成是动脉粥样硬化(AS)发生发展的关键步骤。最新研究发现,CD163是只存在单核巨噬细
目的:该文用免疫组织化学染色方法检测了妊娠滋养细胞疾病中FHIT、PTEN基因的表达,以探讨其在妊娠滋养细胞疾病发生、发展中的作用及其临床病理意义.结论:1.自然流产水肿绒毛
学位
手足口病(Hand, food and mouth disease, HFMD),是一种世界范围内常见的儿童流行传染病,可由多种肠道病毒引起,其中,柯萨奇病毒A组16型(Coxsackievirus A16, CA16)是导致该
目的 通过对人淋巴组织中乙酰胆碱受体(acetylcholine receptor,AChR)的α3亚基、α5亚基(α3-subunit,α5-subunit)及m3亚型(m3-subtype)mRNA的检测,寻求副交感神经系统对免疫
人β-NGF基因在大肠杆菌与仓鼠卵巢细胞中的表达 神经生长因子(Nerve growth factor, NGF)是最重要的神经营养因子之一,在神经、免疫、造血、生殖及内分泌等系统均有重要生