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目的:建立分泌抗海洋褐胞藻、卵圆褐胞藻、赤潮异弯藻、具齿原甲藻、尖刺拟菱形藻等五种藻的高特异性、高亲和性单克隆抗体杂交瘤细胞株。若该类细胞株所分泌的单克隆抗体结合特定藻抗原,则可利用此类单克隆抗体鉴别此五种不同的藻,从而为赤潮藻的检测、监测和防治提供有效的工具。 方法:将五种藻混合免疫Balb/c小鼠,加强免疫三次后,取血清效价高的小鼠脾脏细胞按一定的比例与SP2/0骨髓瘤细胞混合,加入PEG4000使两者融合。用HAT,HT等选择性培养基培养杂交瘤细胞,然后用间接血凝初步筛选出有抗体分泌的细胞克隆。进一步采用间接ELISA法等,用海洋褐胞藻等五种赤潮藻细胞包被96孔酶标板筛选分泌特异性单克隆抗体的克隆。扩增阳性克隆并冻存,制备腹水,测定腹水效价,用硫酸氨,protein-A等法纯化腹水型抗体。 结果:所得杂交瘤细胞融合率为37.5%。经反相间接血凝、间接ELISA法等筛选到能分泌抗藻单克隆抗体的细胞株,其中9AD2B2对海洋褐胞藻和卵圆褐胞藻的特异性高;15CA7对赤潮异弯藻和尖刺拟菱形藻的特异性高;23BG2和23BG9对赤潮异弯藻、具齿原甲藻与尖刺拟菱形藻的特异性高。而获得的M18号杂交瘤细胞株分泌的单克隆抗体可与以上五种藻产生高效价的明显交叉反应,显示此单抗可代替五种海洋藻的抗血清。在藻最佳包被浓度时,9AD2A8腹水对五种藻的效价均可达到1:3200,23BG9E11腹水五种藻的效价可达1:1280,两种腹水主要成分均为IgG1。 结论:利用杂交瘤技术能制备出分泌抗五种藻的单克隆抗体的细胞株。该类细胞株分泌的单克隆抗体可特异性地结合到五种藻细胞上,这意味着可用此类单克隆抗体鉴定、检测这五种赤潮藻。