研究背景胃癌是全球面临的重大公共卫生问题和主要的恶性肿瘤致死病种之一。目前,其治疗效果和预后不尽如人意,亟待开发新型抗癌药用于进展期或晚期胃癌患者的治疗。近年来,以自噬为靶点的治疗是癌症治疗研究的一个热点。植物来源的化学物质是临床药物的宝贵来源。海南地不容含有克班宁、氧化克班宁等多种天然的阿朴啡生物碱。尽管有研究表明,克班宁对一些癌细胞具有细胞毒性作用,但氧化克班宁在癌细胞中的作用和机制鲜为人知。本研究探讨了氧化克班宁在人胃癌细胞中的细胞毒活性及其可能的作用机制。研究目的利用体外培养的胃癌细胞和裸鼠移植瘤模型,研究氧化克班宁在抑制胃癌细胞系SGC-7901生长的作用,并从细胞凋亡和自噬方面入手探讨氧化克班宁抑制SGC-7901细胞生长的分子机制及信号通路,为开发利用其作为治疗胃癌候选药物提供依据。研究方法采用柱色谱技术从海南地不容中分离出氧化克班宁（Crebanine N-oxide,or Oxocrebanine,OXO）,用核磁共振波普法对其进行结构鉴定,利用高效液相色谱法对其进行纯度鉴定。随后,分别通过MTT实验、BrdU标记实验、克隆形成实验和形态学观察实验,研究了氧化克班宁在体外对SGC-7901细胞增殖的抑制作用。进一步,通过制备裸鼠荷瘤模型,结合肿瘤活体成像技术和免疫组织化学技术研究了氧化克班宁（10 mg/Kg）腹腔注射对胃癌生长的抑制作用。为了探讨氧化克班宁抑制SGC-7901细胞增殖的分子机制,我们首先应用Annexin V-FITC/PI双染试剂盒检测了氧化克班宁对SGC-7901细胞凋亡水平的影响,然后选用Western blot检测了氧化克班宁处理对细胞凋亡的效应分子（Caspase-3和PARP）、抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2及促凋亡蛋白Bax和Bak的表达变化。为了验证氧化克班宁与自噬的关系,本研究首先采用Western blot检测了氧化克班宁对细胞自噬相关蛋白表达的影响,然后在自噬抑制剂3-MA处理的基础上验证了氧化克班宁通过自噬影响胃癌细胞增殖的作用。研究结果本研究成功提取到了纯度达95%的氧化克班宁。体外研究显示,氧化克班宁在12μM时即可显著抑制SGC-7901细胞的增殖。荷瘤小鼠体内的研究结果显示,10 mg/Kg的氧化克班宁腹腔注射可显著抑制肿瘤的生长。机制探讨结果显示,氧化克班宁可通过下调抗凋亡蛋白Mcl-1和Bcl-2的表达、增强促凋亡蛋白Bax和Bak的表达,从而上调SGC-7901细胞的凋亡水平。我们的研究还发现,氧化克班宁可显著上调SGC-7901细胞的自噬水平,采用3-MA抑制细胞自噬后可进一步抑制SGC-7901细胞的增殖,提示自噬有助于SGC-7901细胞的存活与增殖。进一步研究发现,氧化克班宁主要通过抑制Akt/mTOR信号通路而诱导SGC-7901细胞自噬的发生。研究结论1.氧化克班宁可在体外、体内抑制人胃癌细胞系SGC-7901的生长,其机制可能与其诱导胃癌细胞发生凋亡有关。2.氧化克班宁可通过Akt/mTOR信号通路诱导人胃癌细胞系SGC-7901发生自噬,这种自噬可能有助于胃癌细胞的生存与增殖。