蓖麻耐盐基因RcSOS1功能分析

来源 :内蒙古民族大学 | 被引量 : 2次 | 上传用户:dingyongguo
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盐胁迫严重影响植物的生长、发育、地理分布和作物产量,利用植物基因工程选育耐盐作物品种已经成为了开发和改造盐碱地的一项有效生物治理措施。本研究以通蓖5号为材料,利用cDNA末端快速克隆法(Rapid amplification of cDNA end,RACE)克隆蓖麻质膜型Na+/H+逆向转运蛋白基因(RcSOS1),通过生物信息学进行分子特征分析,并以洋葱表皮细胞和烟草为受体,对RcSOS1基因异源表达产物进行定位和功能研究。利用发根农杆菌侵染,建立蓖麻高效毛状根诱导体系,并通过过表达RcSOS1蓖麻毛状根分析基因功能。本试验为蓖麻耐盐新种质研究奠定基础,研究主要结果如下:1.利用RACE法成功克隆了RcSOS1,该基因包括一个完整的开放阅读框,推测编码1134个氨基酸。多重序列比对表明RcSOS1与其他植物质膜型Na+/H+逆向转运蛋白一致性为74.18%,结构分析发现Rc SOS1含有12个跨膜结构域和101个磷酸结合位点。2.利用洋葱表皮亚细胞定位试验表明RcSOS1基因表达产物作用于细胞膜上。通过烟草毛状根途径进行转基因,对再生植株检测表明,RcSOS1已成功插入烟草基因组中并且能够正常转录。本试验测量了200mM NaCl处理45天转Rc SOS1基因与非转基因植株的钠钾含量、电渗漏、脯氨酸含量以及丙二醛含量,结果表明转基因植株叶片Na+的含量均显著低于非转基因植株,K+的含量均显著高于非转基因植株,RcSOS1提高转基因植株耐盐性可能由于Na+外排,提高植物体内的K+/Na+比值,维持了细胞内稳态。同时,Proline含量的增加、MDA含量降低和电解质泄漏率的降低有助于消除过多的活性氧簇以及维持细胞膜的稳定性。3.本试验利用三种不同发根农杆菌(R1000、C58C1、ATCC15834)对蓖麻毛状根诱导。研究表明,R1000菌株诱导率最高,菌液浓度OD600=0.5,外植体培养3d,菌液侵染10min,添加50mg/l乙酰丁香酮的MS培养基的诱导效率最高,建立了蓖麻毛状根诱导体系,为构建蓖麻毛状根遗传转化体系奠定基础。通过200mM NaCl处理蓖麻毛状根,过表达RcSOS1基因能增加Proline含量的积累和减少MDA含量,同时Na+含量减少和K+含量增加,提高K+/Na+比值,初步分析RcSOS1基因具有提高植株耐盐性。
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