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PIH1D1是一个在真菌与哺乳动物中进化保守的、隶属于R2TP复合物(Rvb1/Rvb2/Tah1/Pih)的支架蛋白,其在酵母中名为Pih1。伴侣样蛋白复合物R2TP被认为涉及诸如小核仁蛋白复合物等多重复合物的装配过程。然而,R2TP复合物自身的装配过程仍然未知。近些年来,R2TP复合物最近被认为在多种生物途径中起重要作用。诸如R2TP-Hsp90复合物结合Prefoldin-like复合物(PFDN2, PFDN6, UXT, RPB5, WDR92/Monad, PDRG1,和URI)被认为与RNA polymerase Ⅱ(RNAPⅡ)相互作用并介入其组装过程；与磷酸化的Te12尤其是mTOR和SMG12结合参与PIKK信号通路；与Monad/WDR92相互作用并激活TNF-a和CHX介导的caspase-3激活,促进细胞凋亡；影响boxC/D snoRNP的组装和其由核基质向核仁的运输。PIH1D1的N端连接Rvb1/2在R2TP复合物中起核心支架作用；同时也连接着R2TP的靶蛋白,例如上述的Rrp43 (snoRNP/核糖体相关蛋白)、Nop58(box C/D snoRNP组分之一)、Nop53(核仁必需蛋白)、磷酸化的Te12(端粒DNA结合蛋白)。PIH1D1本身是一个不稳定的蛋白,在体内易于降解,在体外容易聚集沉淀。体内需要在与HSP90和Tahl结合才能稳定存在。之前对PIH1的研究多是伴随着RPAP3在R2TP复合物为出发点,已知的数据表明RPAP3大多是在胞质分布的,而PIH1D1的全细胞分布,尤其是核仁定位,显示其本身具有非依赖R2TP复合物的功能。以PIH1D1为核心的蛋白网络还未见报道。于是本实验构建了在HEK293T细胞中稳定表达flag-HA双标签的PIH1D1细胞株,通过FLAG-HA Tandem Affinity Purification双标签纯化实验,并进行质谱分析研究PIH1D1在体内的关系网,为阐明PIH1D1在体内的复合物状态和功能提供了进一步依据。