抗体酶,又称催化性抗体,其本质是一类具有催化活性的抗体,在可变区赋予其酶的属性。乳中富含抗体,已有研究发现健康母乳中的部分抗体可同时兼有酶的性质。牛初乳作为一种特殊的乳,其抗体含量远大于常乳,本实验室已有先前研究表明牛初乳中IgG抗体也具有脱氧核糖核酸酶(DNAse)活性,本论文将进一步研究牛初乳中IgG及其轻链片段的抗体酶活特性特,探讨牛初乳IgG抗体酶活力的本质。 本文具体研究内容及结果如下： 1.牛初乳IgG抗体酶的最适pH值在4.0左右,偏酸性,且它的活性不依赖于二价金属离子,没有二价金属离子参与时依然具有较高的活力,即IgG抗体酶可归类于DNaseII类酶(又称酸性DNase)。 2.采用盐析法结合葡聚糖G-100凝胶层析分离纯化牛初乳IgG,然后通过还原法制备IgG轻、重链,并通过葡聚糖G-100凝胶层析分离得到两种多肽链片段,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳显示得到的轻链纯度较高,几乎不含有其他杂蛋白,而重链则含有少量的轻链。 3.IgG分子及其轻、重链样品与质粒DNA底物的内切反应混合物琼脂糖电泳图谱,以及对IgG、重链以及轻链样品的DNAse活力测定结果显示,轻链也具有一定的水解DNA的能力,初步认为牛初乳IgG抗体酶的催化中心位于其轻链。但重链和轻链的协同作用使得IgG分子具有最大抗体酶活力,二者对IgG分子与DNA的结合及水解都有重要的意义。 4.进一步研究发现牛初乳IgG轻链片段的DNase酶活的最适pH值仍在4.0附近。Mg2+,Ca2+,Na+在较低浓度下对酶活有轻微激活,浓度较高时起抑制作用,并在达到一定高浓度时完全抑制酶活性。而Mn2+、EDTA对该酶活基本没有激活作用,并在达到一定高浓度时完全抑制酶活性。与IgG完整分子的酶活特性对比后发现,两者酶切反应的最适pH值以及各种金属离子对反应的影响都有相当程度的相似性,进一步证实牛初乳IgG的DNase抗体酶的催化中心主要位于其轻链。