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随着大量与人类疾病和药物治疗相关的单核苷酸多态性(Single-Nucleotide Polymorphism, SNP)的发现,出现了多种对SNP进行检测的方法和技术。然而,大多数方法由于受到检测灵敏度低,需要昂贵的实验设备及试剂,或需要专业操作人员等方面的限制,无法在常规的临床检验中推广使用。设计特定组成和功能的检测探针,建立了一种对SNP位点、短片段插入或缺失位点进行分型检测的新方法。该法主要包括以下几个步骤：(1)对SNP位点所在片段进行PCR扩增；(2)在DNA聚合酶的延伸作用(Fill-in)和DNA连接酶的连接作用(Ligation)双重特异性保证的基础上,对等位基因的检测位点进行识别；(3)基于磁分离技术的原理,使用链亲和素磁性微粒对含有检测位点等位基因特异性片段进行纯化,减少反应体系中其它成分对后续分型检测的影响,进一步增强检测体系的特异性。(4)对纯化后的等位基因特异性片段进行扩增以增加检测灵敏度；(5)通过琼脂糖凝胶电泳、ELISA检测或通用寡核苷酸芯片技术三种不同方式实现分型检测。琼脂糖凝胶电泳和ELISA检测实现的分型,不需依靠昂贵的检测仪器及试剂,即可达到快速、特异性好和灵敏度高等特点,该法能够在常规实验室实现对肿瘤组织等不均一样本进行低拷贝等位基因的检测。如果利用通用寡核苷酸芯片技术实现基因分型,可以使用单色荧光标记系统,以简单的荧光扫描设备和简便的结果分析方法实现中、高通量的SNP分型检测。以苯二异硫氰酸酯(p-phenylene diisothiocyanate/1,4-phenylene diisothiocyanate, PDC)作为双功能交联剂,对氨基末端磁性微粒的表面进行修饰而制备活化磁性微粒。通过将链亲和素共价偶联于活化磁性微粒表面而制备链亲和素磁性微粒用于SNP分型检测研究。用聚合连接反应-琼脂糖凝胶电泳方法对药物代谢酶基因CYP3A4、CYP2B6和药物靶点基因EGFR(Epidermal growth factor receptor)的8个SNP位点和一个短片段插入／缺失位点进行了检测,结果表明,此方法具有很好的特异性和灵敏度,能够将仅占0.5%比例的突变型等位基因从混合样本中检测出来。对35例非小细胞肺癌组织样本EGFR,c.2573T＞G(L858R)位点的检测结果显示,用聚合连接反应-琼脂糖凝胶电泳方法能够检测出8例杂合子样本,而用常规的直接测序方法仅能够检测出2例杂合子样本。表明此方法具有较高的灵敏度,适合于对肿瘤等不均一组织样本的SNP检测研究。和琼脂糖凝胶检测方法相比,8例杂合子样本的酶联免疫检测结果,其阳性和阴性信号的对比结果更为明显,表明ELISA显色具有更高的灵敏度,同时可实现更大的通量。以聚合连接反应-通用寡核苷酸检测芯片对药物代谢酶相关SNP检测的技术进行了初步研究,药物代谢酶CYP2D6基因上的7个SNP位点进行芯片检测,各个位点的阳性杂交区域均具有明显的荧光信号值,并且具有明显的阳性和阴性信号对比,显示了建立的聚合连接反应-通用寡核苷酸芯片检测方法能够应用于中、高通量SNP检测。