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研究背景肝脏疾患是影响人类生命健康和生活质量的主要疾病之一,肝纤维化是机体对慢性肝损伤的主动性修复反应,是多种慢性肝病病情发展的共同病理基础,也是疾病发展至肝纤维化的必经环节。临床和基础研究已经证实,肝纤维化阶段,过度沉积的细胞外基质是可以逆转,因此阻断肝纤维化是治疗慢性肝病,防治肝硬化的关键。基于筋膜发育生物学的追溯,结合中医针灸理论、经络的现代研究和虚拟人研究成果,筋膜学理论认为筋膜(结缔组织)是经络的解剖学基础,其中“穴位”是筋膜支架上富含神经感受器和活性细胞而能产生较强生物信息物质的汇集处。肝纤维化主要源于肝间质细胞及细胞外基质,与筋膜对应吻合。而干细胞和针灸的应用与疗效早已被明确。为探讨针刺筋膜治疗肝纤维化的细胞学作用机制,本研究选择人胚胎间充质干细胞(hESCs)作为示踪细胞,利用hESCs的全能性及多向分化潜能,采用将重组腺病毒载体Ad5-EGFP标记的hESCs作为示踪细胞移植入肝纤维化模型大鼠体内,观察针刺穴位与筋膜干预下,示踪细胞在体内的分布、分化迁移轨迹,试图阐明针刺穴位与筋膜治疗肝纤维化可能的细胞学作用机制。目的采用电针穴位与筋膜,观察标记的hESCs移植入肝纤维化模型大鼠体内的分布、分化迁移轨迹,探讨针刺穴位与筋膜治疗肝纤维化可能的细胞学作用机制。方法1健康SD雄性大鼠96只,随机分为8组。即：正常组、模型组、正常+干细胞组、模型+干细胞组、电针期门穴+干细胞组、电针期门筋膜+干细胞组、电针阳陵泉穴+干细胞组、电针阳陵泉筋膜+干细胞组,每组12只动物。除正常组外其余各组大鼠每天给予“白酒-吡唑-猪油”混合物灌胃即酒精性肝纤维化造模,至第九周结束。正常组大鼠按照实验动物研究“等效剂量”的计算方法给予生理盐水灌胃。2hESCs进行重组腺病毒载体Ad5-EGFP标记,荧光显微镜下观察标记率。3造模后,重组腺病毒载体Ad5-EGFP标记的hESCs经尾静脉移植至除正常组和模型组外的其余各组大鼠体内。4造模后,电针期门穴+干细胞组、电针期门筋膜+干细胞组、电针阳陵泉穴+干细胞组、电针阳陵泉筋膜+干细胞组,分别进行电针干预,电针时间为20分钟,疗程21天。5用20%乌拉坦以0.5ml/100g剂量将各组动物麻醉,各组动物腹主动脉取血,血液离心后血清进行血清学相关指标检测：取各组动物肝并冰冻切片,普通光镜下观察肝组织形态结构变化和荧光显微镜下观察标记细胞的分布状况。结果1血清学指标、HE染色及免疫组织化学法检测结果均显示改良后的酒精性肝纤维化模型大鼠造模成功。2经Ad5-EGFP标记48h后的hESCs,于荧光显微镜蓝色光激发下可见标记的hESCs发出绿色荧光,细胞标记率达90%。贴壁细胞呈梭形或三角形,细胞中荧光颗粒较多,荧光强,表明Ad5-EGFP标记hESCs获得成功。3电针与干细胞移植各组的血清学指标、HE染色及免疫组织化学法检测结果均显示具有不同程度的抗肝纤维化功效。4电针期门穴、陵泉穴与电针期门筋膜、陵泉筋膜相比较,穴位与筋膜间无统计学差异。结论1.改良后的酒精性肝纤维化模型大鼠造模成功。2.电针与hESCs移植对防治肝纤维化均有效。3.采用Ad5-EGFP转染hESCs具有直接、简单、高效的特点。4.电针可改善机体的微环境,从而加速诱导hESCs靶向迁移,其详实的细胞学机制有待进一步研究。