龟板为龟科动物乌龟的腹甲，是中医常用的名贵药材之一[1]。龟胶由龟板熬制而成，为常用的补益中药，具有滋养、强壮、补血止血、抗衰防老等功效，被历版中国药典收载[3]。 龟胶主要化学成为动物胶、包括氨基酸、蛋白质、微量元素等[2]。研究表明，对龟胶进行酶解就可以制得龟板肽。龟板肽不仅具有良好的消化吸收特性，而且还具有比龟胶更有效的生理功能作用，将龟胶酶解成龟板肽类物质，使得龟胶有效成分更易于吸收。 本文综述了近年来龟胶的研究进展、酶法水解研究进展、质谱在中药成分分析中应用，补血中药药效学研究；并主要研究了龟胶的酶解工艺以及酶解前后在分子量及药效学的变化，以期能在以后的药理学研究中获得更好的效果。 本课题主要做了以下五个方面的的工作： 1.首先用微量凯氏定氮法测定实验所采用的原料龟胶的蛋白质含量，并确定测量水解度的方法。原料龟胶的蛋白质含量测定的结果为71.88％，比文献报道的稍低; 2.以水解度为指标，采用单因素实验法考察底物浓度、酶加入量、酶解时间、酶解温度、pH值五个因素对水解的影响，得出各个单因素条件的最佳值。单因素最佳条件为：酶加入量8％、底物浓度0.10g/ml、酶解时间8h、酶解温度50℃、pH值为8.5。 3.在单因素实验的基础上，采用L16(45)正交实验设计得出工艺条件各个最佳值，并对实验数据进行分析得出各个影响的因素的主次顺序为：酶解时间的影响最大，其次是酶解温度，而后是底物浓度、酶加入量和pH值。正交实验最佳条件为:酶加入量8％、底物浓度0.10g/ml、酶解时间7h、酶解温度60℃、pH值为9.0。然后对比单因素实验同正交实验的实验数据，对酶解时间、酶解温度、pH值三个因素条件进行正交优选，用L4(23)正交实验设计，得到最佳工艺条件为：酶加入量8％、底物浓度0.10g/ml、酶解时间8h、酶解温度60℃、pH值为8.5。综合以上研究，得到酶水解的最佳工艺条件为：酶加入量8％、底物浓度0.10g/ml、酶解时间8h、酶解温度50℃、pH值为8.5。 4.在对水解以后的样品的分子量及其分布的研究中，采用质谱(MS)法进行测量。结果表明：水解前的原料龟胶的分子量主要分布在200～1500之间，含量比较大的几种物质的分子量主要在500～1000左右，而且分布的比较集中；水解后的样品分子量主要分布在75～300之间，比未降解的原料有了大幅度的降低，且分子量分布也变宽。 5.在对水解以后的样品的药效学的研究中，进行动物实验并测量酶解前后服药动物血红蛋白含量。龟胶组和龟胶酶解物组HB含量无显著差异。统计学比较意义P＜0.001。 综上，本文通过单因素实验和正交实验确立了龟胶酶解工艺，并且进行了分子量测定和药效学研究，研究表明，龟胶酶解可以显著降低龟胶分子量，但药效无明显差异。