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ORF2基因编码的蛋白是猪圆环病毒2型的主要结构蛋白,此蛋白具有较好的免疫原性。本实验从重组质粒pMD18-T-ORF2切下ORF2基因片段,克隆到载体pEGFP-C1上,再切掉移码的碱基,补平,自身连接转入DH5a中。经双酶切、测序鉴定ORF2基因片段正确的克隆到pEGFP-C1载体上。将重组质粒pEGFP-C1-ORF2转染到IBRS-2细胞中表达,经SDS-PAGE检测,表达的蛋白约为59KD。经Western-blot检测,能够被PCV-2阳性血清所识别,具有良好的抗原性。 利用表达的融合蛋白作为抗原,建立了检测PCV-2抗体的间接ELISA方法,并对ELISA的反应条件进行了摸索,确定了抗原的最适包被浓度为3.6ug/ml,最适血清稀释度为1∶40,以酶标SPA作为二抗,最适工作浓度为1∶80。包被的融合蛋白不与猪瘟、猪伪狂犬病、猪细小病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒的阳性血清发生交叉反应,重复性好,与IDEXX试剂盒相比,特异性为96%,敏感性为90%,两者的符合率为95%。间接ELISA方法的建立为我国进行PCV-2的诊断与监测以及血清学调查提供了一种技术手段。