纳米级灵芝粉末和破壁灵芝孢子粉的化学成分及体外药理活性研究

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数千年来,天然药物以其特有的药理活性及低毒、高效等在治疗中独特优势赢得了越来越多的国内外学者的广泛关注。而中草药作为一种天然的植物药物,已广为大众所接受。而灵芝这种具有五千多年历史的中药,更是备受关注。目前,灵芝主要作为药品和食品在人们中得到普遍的应用,其中灵芝及灵芝孢子的抗肿瘤的功能也日益得到了人们的重视。而关于灵芝及灵芝孢子的研究也越来越多。本报告通过研究灵芝,灵芝孢子的纳米化方法及破壁工艺的研究,及电镜图片观察灵芝化及破壁的过程。利用对研磨时不同因素(转速,时间,球料)的影响,来衡量其纳米化及破壁效率。结果表明速度对灵芝的纳米化及灵芝孢子破壁都具有重要的影响,速度越快相对时间内灵芝的纳米化及灵芝孢子破壁的效果越好,球料比对纳米化和破壁的影响较小。将灵芝和纳米级灵芝,灵芝孢子及破壁灵芝孢子四种中药,通过溶剂提取的方法将不同溶剂提取量进行对比研究,由于与溶剂接触的表面积及灵芝孢子坚硬的细胞壁,会影响溶剂提取物的量。用此衡量纳米化及破壁等因素对提取物量的影响,对不同溶剂提取物量具有重要的意义。在此部分实验中,我们利用石油醚提取物(PE)、氯仿提取物(CE)、丙酮(AE)、甲醇提取物(ME)、水提取物(WE)五种不同溶剂对四种中药进行提取量的对比,从中得出纳米级灵芝粉末溶剂提取量明显高于原灵芝粉末,破壁后孢子溶剂提取量明显高于未破壁处理的灵芝孢子,纳米化后水提取物是未纳米化的3.63倍,破壁石油醚提取物破壁为未破壁的2.02倍,氯仿提取物是未破壁的3.14倍,水提取物是未破壁的2.07倍。对比灵芝,灵芝孢子,纳米级灵芝及破壁灵芝孢子四种中药的水提物的总糖含量测定过程中,不难发现纳米化及破壁可提高中药中的总糖含量,其中纳米化灵芝总糖是原灵芝的2.11倍,破壁后的总糖含量是未破壁的1.43倍。并通过对纳米级破壁后石油醚提取物进行GC-MS分析让我们更清楚的看到不同溶剂提取物提取量的变化。结果中灵芝粉末和纳米灵芝粉末分别从石油醚提取物中鉴定出个54和59种化合物,其中有35种相同成分别占石油醚提取物的39.94%和50.28%。在灵芝孢子及破壁后灵芝孢子石油醚提取物中鉴定出21和26个化合物,几乎都是饱和脂肪酸和烷烃类等物质,其中仅有6种相同,占石油醚提取物的53.7%和53.54%。为了将纳米化与破壁的结果经过更深入的对比,让读者更了解本纳米化及破壁的优点。我们通过对细胞毒性,氧化应激性,及凋亡坏死的衡量,让人们更清晰的了解纳米化对细胞的作用,从而保证在安全的基础上让纳米化中药有更多更广的应用前景。总结结果后利用不同溶剂提取物对Hela及Sra01/04细胞经行处理,对灵芝纳米化及破壁灵芝孢子经行粗略的细胞学实验。在对细胞的毒性影响中,水溶剂提取物对细胞有明显的增殖抑制作用,石油醚提取物有一定抑制作用,其它溶剂提取液则无明显抑制作用。另外,在不同溶剂提取物对细胞的氧化应激反应实验中,发现石油醚提取物有较高的氧化应激反应,水提取物同样有较高的氧化应激反应,甲醇提取物部分浓度有一定氧化应激作用,其余组分部分有氧化应激反应但不明显。在对水提取物经行细胞凋亡坏死分析实验中,总结结果发现部分浓度石油醚提取物对细胞略有凋亡坏死的影响,水提取物凋亡坏死作用明显,甲醇提取物虽能引起氧化应激作用,但不能导致细胞的凋亡和坏死。本论文将现代纳米技术与中医药相结合,将中药提取成分利用细胞技术经行讨论,以帮助人们更清楚纳米化中药可能对人体产生的影响,和中药纳米化对人类的帮助。希望通过这样的方法降低成本,解决服用及靶向等相关方面的作用。从而可以制定更合理的服用及问题应对方法,为将来的中药纳米化方法及应用提供有利的参考价值。
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