【摘 要】
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将克隆在pMD-T载体上的VP2全基因(2.0kb)插入原核表达载体PET30a+,得到重组质粒pET30a+-VP2,转化大肠杆菌BL2T(DE3),IPTG诱导后裂解菌体作SDS—PAGE分析,未看到特异性表达带,
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将克隆在pMD-T载体上的VP2全基因(2.0kb)插入原核表达载体PET30a+,得到重组质粒pET30a+-VP2,转化大肠杆菌BL2T(DE3),IPTG诱导后裂解菌体作SDS—PAGE分析,未看到特异性表达带,我们对BL21(DE3)生长条件进行了变化摸索,但在SDS—PAGE胶上始终没有肉眼可见的目的条带。所以初步推测VP2基因中存在不适于在大肠杆菌体系表达的某种元件或表达量过低而难于检测。 将克隆在pMD-T载体上的VP2全基因(2.0kb)插入真核表达载体pEGFP-C1得到重组质粒pEGFP-VP2,用磷酸钙共沉淀法转染IBRS-2细胞,通过G418加压筛选阳性克隆,利用荧光显微镜、SDS-PAGE、Western-blot检测表达情况,结果表明上述质粒能在IBRS-2细胞中表达。通过盐析法对重组表达蛋白进行初步纯化,并利用纯化产物作为抗原,初步建立了检测PPV抗体的间接ELISA方法,用该方法进行临床样品检测,并与血凝抑制试验做比较,具有更高的灵敏性。
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ue＊M＃’＃dkB4＃＃8＃”专利申请号:00109“7公开号:1278062申请日:00.06.23公开日:00.12.27申请人地址:（100084川C京市海淀区清华园申请人:清华大学发明人:隋森芳文摘:本发明属于生物技
ue＊M＃’＃dkB4＃＃8＃”专利申请号:00109“7公开号:1278062申请日:00.06.23公开日:00.12.27申请人地址:（100084川C京市海淀区清华园申请人:清华大学发明人:隋森芳文摘:本发明属于生物技
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