花生青枯病拮抗菌的分离鉴定、发酵条件及活性产物的研究

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花生青枯病是由青枯劳尔氏菌(Ralstonia solanacearum)引起的一种细菌性土传病害,其广泛分布于全国各花生产区,其中以长江流域及其以南地区发病尤为严重,已成为花生主要病害之一,威胁着我国花生的生产。由于常规防治方法存在种种弊端,根际细菌介导的生物防治正成为备受人们关注的一种有效方法。本试验针对花生青枯病菌,主要进行了拮抗放线菌的筛选、鉴定、发酵条件优化,以及对拮抗物质的理化性质进行了初步研究,其结果分述如下:(1)本试验首先分离出一株花生青枯病病原菌Rsl,并以此为指示菌,从土壤中分离到80株形态不同的菌株,从中筛选出一株拮抗效果最好的菌株A31,其连续转接6代拮抗效果没有显著差别,遗传稳定性较强。通过温室盆栽试验表明拮抗菌A31的防治效果达到58.3%。(2)菌株A31基内菌丝无横隔、气生菌丝多分枝,孢子椭圆形;细胞壁化学组分Ⅰ型,糖型C型,可将菌株A31归属于链霉菌属(Streptomyces).16SrRNA基因与S. purpureus和S. chrysomallus的同源性为98%。(3)研究了菌株A31的发酵条件,确定了最佳培养基组成及培养条件。单因素发酵试验和正交试验表明:最佳碳源为3%可溶性淀粉,最佳氮源为0.8%大豆蛋白胨,无机盐以0.05%磷酸氢二钾,0.025%硫酸镁为最佳;接种量6%,发酵时间108h,培养基初始pH6.0~8.0,培养基装量60mL/250mL三角瓶,发酵温度28℃,摇床转速200r/min。(4)从链霉菌A31的发酵液中提取的抗菌粗提物对青枯劳尔氏菌具有明显的抑制效果,并对油菜菌核菌和土豆立枯丝核菌等植物病原真菌拮抗效果好。其具有良好的热稳定性,能耐受121℃高温;在pH2.0~12.0范围内和保持稳定;抗菌物质对紫外线稳定;在4℃条件下储藏稳定性更好。(5)通过薄层层析对其的发酵粗提物进行分离,得到9个组分,有两个有拮抗活性,其中组分9起主要抗菌活性。用Doskochilova八溶剂纸层析系统对组分9进行抗生素类型的初步分析,初步确定其为一种金色抗霉素类抗生素。一级质谱初步检测其分子量为330.6。
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