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目的：研究酵母菌表达抗人CCR4 (Anti-hCCR4)免疫毒素蛋白,研究其生物学活性。方法：运用巴斯德毕赤酵母Pichia Pastoris表达免疫毒素蛋白,经镍柱和离子柱纯化蛋白。用SDS-PAGE和Western Blot鉴定蛋白,用BCA法测定蛋白浓度。纯化的蛋白用NHS-Sulfo生物素标记技术,用流式细胞技术检测其对CCR4阳性细胞的特异性粘附作用。用3H标记的蛋白合成抑制试验和细胞增殖抑制试验检测免疫毒素对靶细胞的毒性作用。用流式细胞仪检测免疫毒素蛋白对人外周血淋巴细胞中CCR4阳性细胞特异性杀灭作用。最后用免疫缺陷小鼠(NSG)尾静脉注射肿瘤细胞,构建肿瘤模型,检测免疫毒素在小鼠体内的生物学活性。结果：经过表达和纯化得到了单价Anti-hCCR4免疫毒素蛋白(70.26kDa),双价Anti-hCCR4免疫毒素蛋白(97.57 kDa)和Foldback Diabody Anti-hCCR4免疫毒素蛋白(96.31kDa)。Anti-hCCR4免疫毒素均可特异性粘附CCR4阳性肿瘤细胞和人外周血淋巴细胞中CCR4阳性细胞群;该免疫毒素可以特异性抑制CCR4+ CCRF-CEM肿瘤细胞蛋白合成和增殖,可以特异性杀灭外周血淋巴细胞中CCR4阳性细胞群;并且该免疫毒素对CCR4阴性细胞几乎没有粘附和杀伤作用。在小鼠肿瘤模型内,双价和Foldback Diabody免疫毒素在小鼠体内可大量杀伤肿瘤细胞,延长小鼠存活时间。结论：本研究中成功表达和纯化了三种Anti-hCCR4免疫毒素,通过实验证实该免疫毒素可特异性粘附和杀灭CCR4阳性细胞,其中双价和Foldback Diabody免疫毒素在小鼠体内有较强的生物学活性,为下一步临床应用奠定了基础。