莪术组植物的DNA条形码鉴定及药材的质量评价研究

来源 :广东药学院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tongchenggouwu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
莪术(CURCUMAE RHIZOMA)为姜科植物蓬莪术Curcuma phaeocaulis Val、广西莪术Curcuma kwangsiensis S.G.Lee et C.F.Liang或温郁金 Curcuma wenyujinY.H.Chen et C.Ling的干燥根茎。后者习称“温莪术”。莪术为常用中药,国内需求量较大,同时大量出口东南亚、日本、美国等地。本文综合应用了传统鉴定方法和DNA条形码技术相结合的手段对三种不同来源的莪术进行研究,并对其质量进行综合评价,从而为莪术的开发利用提供依据。  目的:  莪术作为多来源的药材,临床使用十分混乱。其不同来源药材的外观性状相近,就连一些专家学者都难以分辨,国内学者对其分种问题也一直存在着争议。鉴于莪术市场存在的来源不明等情况比较严重,有必要建立基于DNA条形码的莪术鉴别体系,对传统鉴定加以补充。对不同来源的莪术进行质量监控,明确不同来源莪术的化学成分差异,以更好地指导莪术的临床应用。  方法:  1.传统的基原鉴定及性状鉴定:参照《中国植物志》、《中国药典》,结合药材的性状鉴定,根据专家鉴定结果,初步判断来源。  2.DNA条形码鉴定:采用CTAB法、试剂盒法提取基因组总DNA,以ITS2,psbA-trnH做为通用引物,运用2*PCR MIX试剂盒进行PCR扩增,产物经测序后得到序列,通过Codon Code Aligner4.2.5、Mega6.05等软件对测序后的序列进行系统分析,考察不同种之间的亲缘关系,建立莪术组植物的分子鉴定方法。  3.常规检查:根据《中国药典》(2010年版一部)莪术项下对所收集样品进行常规项检查,为后续的实验结果提供基础数据及依据。  4.气相色谱分析:运用GC测定法,参考文献,并加以改进,建立了莪术GC指纹图谱的研究方法。绘制其指纹图谱,进行比对、研究;并运用聚类分析统计方法对结果加以讨论。  结果:  1.传统的基原鉴定及性状鉴定:经专家鉴定莪术样品分别为蓬莪术、广西莪术、温郁金的原植物及干燥根茎,确定了其基原。  2.DNA条形码鉴定:CTAB法和试剂盒法均能从莪术中提取到足够量的基因组DNA用于PCR的扩增,ITS2、psbA-trnH引物扩增产物经过测序,结果表明ITS2基因间隔区序列存在大量简单重复序列,造成结合、杂合问题,因此选用psbA-trnH序列进行莪术鉴定,并建立了莪术系统进化发育树。  3.常规检查:对莪术进行检查,结果表明灰分测定及浸出物测定项均符合规定,而水分测定项及挥发油测定项有部分样品不符合规定。  4.气相色谱分析:用建立的色谱条件,测定得到的莪术GC图谱,共有15个共有峰,其中指认了4个色谱峰。共有峰的相对峰面积RSD均小于3%,12批的莪术指纹图谱相似度为0.478-0.912;聚类分析结果较好,能将不同产区的莪术聚在一起。  结论:  1.传统的基原鉴定及性状鉴定:传统的鉴定较为困难,需经专业人士的综合判断方能确定其基原。  2.DNA条形码鉴定:ITS2序列暂无法获得成功序列,未能构建发育树。成功获得了psbA-trnH序列,构建了莪术组植物的亲缘关系系统发育树,并对其遗传多样性进行分析。  3.常规检查:对莪术作常规检查,除部分批次水分超出限度外,其余均符合规定。但是不同批次的挥发油含量相差较大。  4.气相色谱分析:通过对各种莪术的图谱进行分析,结果表明不同种间相似度较低,而聚类结果表明不同来源的莪术能聚为一系,表现出高度地域性。
其他文献
本课题以中医药理论和现代药理知识为指导,对导师在多年临床与教学过程中形成的抗肿瘤方剂——五草饮进行适当加减配伍,即提取其中的莪术、仙鹤草两味已被证实确有抗肿瘤作用的中药,另选善于活血通经,祛瘀消肿的益母草,益气养血之黄芪、当归组成实验方剂。理论上,结合导师的临床经验,探讨得出正虚、血瘀、癌毒三者是癌症主要病机的结论;实验研究,观察该方对荷瘤小鼠的一般生存状况、体重、瘤组织病理切片及血清中总NOS、
中药材质量的均一性及其制剂工艺的稳定性是决定中药制剂质量均一性的关键。而中药材的品种、产地、采收期及贮藏期等条件的不同使得中药材质量产生差异,影响其制剂质量的稳定。本课题组以黄芩药材入手,之前采用红外光谱三级鉴别法和主成分分析法对不同品种、产地、采收期及贮藏期的黄芩进行分析,其红外光谱能够反应不同样品中物质基础的差异性特征和总体物质基础的变化。现采用液质联用技术分析不同品种、产地、采收期及贮藏期的