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研究背景与目的宫颈癌是妇女癌症的主要死因之一,发病率和死亡率逐年上升,并且有年轻化的趋势,已成为全球范围内重要的公共卫生问题。现已证实,宫颈癌与人类乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)密切相关,但大部分HPV感染者能在12-30个月内将病毒清除,并不发展为宫颈癌。因此,宫颈癌的发生除了HPV感染外,还与协同因子的存在有关,特别是机体的免疫状态。机体免疫在与病毒斗争中的失败,对HPV的持续感染、病毒基因的整合乃至诱发宫颈癌起到了关键作用。机体的抗肿瘤免疫以细胞免疫为主,而T细胞及其亚群在细胞免疫中起到中心调控的作用,是重要的效应细胞,其中包括有CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞及CD4~+CD25~+FOXP3~+调节性T细胞(regulatory T cell,Treg)。正常情况下,T淋巴细胞亚群之间在数量上保持一定的比例,维持着细胞免疫的平衡。当T淋巴细胞亚群的数量发生变化,各亚群之间的比例平衡被打破,可导致机体免疫功能的紊乱,促进肿瘤的发生与发展。既往对CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞及Treg细胞的研究主要集中在宫颈癌患者的外周血中,但对于它们在宫颈癌组织中的水平在国内还鲜有报道;且目前国内对于T细胞亚群与HPV感染的关系亦鲜有报道。本研究拟应用免疫组织化学的方法,检测包括宫颈癌在内的不同宫颈病变组织中T细胞亚群的数量(包括CD4~+T、CD8~+T淋巴细胞及Treg细胞);并分析T细胞亚群的数量与HPV感染及其型别的关系;进一步探讨T细胞亚群的数量变化在宫颈癌发生发展过程中的作用。材料与方法1.收集宫颈病变石蜡组织标本共179例,其中宫颈炎25例、低级别CIN(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)17例(即CIN1级)、高级别CIN 41例,(包括CIN2级16例,CIN3级25例)、宫颈鳞状细胞癌67例、宫颈腺癌29例。2.采用基因芯片技术对所有病例标本进行23种HPV基因分型检测。3.对所有病例采用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)分别进行CD4、CD8及FOXP3的免疫组化染色。结果1.各组宫颈病变组织中CD4~+T淋巴细胞的数量分别为:宫颈炎115.20±5.59、低级别CIN(即CIN1级)107.80±5.53、高级别CIN(即CIN2级/CIN3级)92.90±12.67、宫颈鳞癌87.10±5.10、宫颈腺癌79.70±5.85。宫颈炎及低级别CIN的CD4~+T淋巴细胞的数量最高,显著高于高级别CIN、宫颈鳞癌及宫颈腺癌(P均<0.05);高级别CIN的CD4~+T淋巴细胞的数量次之,明显高于宫颈鳞癌及腺癌(P均<0.05);而宫颈鳞癌及腺癌的CD4~+T淋巴细胞的数量最少。2.各组宫颈病变组织中CD8~+T淋巴细胞的数量分别为:宫颈炎59.50±5.26、低级别CIN56.30±6.04、高级别CIN70.30±4.65、宫颈鳞癌84.10±3.07、宫颈腺癌80.50±6.79。宫颈鳞癌及宫颈腺癌的CD8~+T淋巴细胞的数量最高,显著高于高级别CIN、低级别CIN及宫颈炎(P均<0.05);高级别CIN的CD8~+T淋巴细胞的数量次之,明显高于低级别CIN及宫颈炎(P均<0.05);低级别CIN及宫颈炎的CD8~+T淋巴细胞的数量最少。3.随着宫颈病变级别的升高,CD4~+T淋巴细胞的数量逐渐减少而CD8~+T淋巴细胞的数量逐渐增多,导致CD4~+T /CD8~+T淋巴细胞的比值逐渐降低。4.各组宫颈病变组织中FOXP3~+淋巴细胞的数量分别为:宫颈炎4.64±4.62、低级别CIN6.12±5.23、高级别CIN18.15±19.63、宫颈鳞癌60.03±28.72、宫颈腺癌27.17±14.08。宫颈鳞癌的FOXP3+淋巴细胞的数量最高,显著高于宫颈炎、低级别CIN、高级别CIN及宫颈腺癌(P均<0.05);腺癌及高级别CIN的FOXP3+淋巴细胞的数量次之,明显高于宫颈炎及低级别CIN(P均<0.05);宫颈炎及低级别CIN的FOXP3+淋巴细胞的数量最少。从宫颈炎、低级别CIN、高级别CIN至宫颈鳞癌中,FOXP3+淋巴细胞的数量有逐渐增多的趋势。5.各组宫颈病变组织HPV基因分型结果:179例病例中,HPV阳性138例,HPV阴性41例,HPV感染率达77.09%。其中HPV单一感染中以高危型别HPV16型最为多见,占59例;其次为18型感染,共有25例;其余为其它型别的感染(包括HPV11、31、33、35、42、45、51、52、56、58、59、66),共有33例;另有21例混合型别的感染(包括HPV6.16、11.16、16.18、16.31、16.33、16.52、16.58、16.59、16.68、18.16、31.58、52.33、58.6、16.33.59)。6. T细胞亚群的数量与HPV感染有一定关系:HPV阳性宫颈病变组织中,每高倍视野下CD8+T淋巴细胞及FOXP3+淋巴细胞数量分别为74.89±10.30及38.69±31.25,均高于HPV阴性组的60.94±7.52及10.61±14.91(均为P<0.05);而CD4+T淋巴细胞的数量HPV阳性宫颈病变组织中为90.19±13.50,低于HPV阴性组的106.33±13.98(P<0.05)。FOXP3+淋巴细胞在不同型别HPV感染宫颈病变组织中的数量亦存在差异,以最为多见的高危型别HPV16型感染的宫颈病变组织的FOXP3+淋巴细胞数量最高,为48.32±30.31,均显著高于混合型的36.90±34.19、HPV18型的31.56±25.78以及其它型别的28.00±30.93(均为P<0.05)。结论1.在宫颈癌组织中,CD4+T淋巴细胞数量减少而CD8+T淋巴细胞的数量增多;并在宫颈癌变过程中CD4+T、CD8+T淋巴细胞的数量呈现一定的规律:从宫颈炎、低级别CIN、高级别CIN至宫颈癌中,CD4+T淋巴细胞数量逐渐减少而CD8+T淋巴细胞的数量逐渐增多,CD4+ /CD8+T的比值逐渐下降甚至倒置。提示随着宫颈病变级别的进展,机体T细胞亚群出现紊乱并不断加剧。2. FOXP3~+淋巴细胞在宫颈癌中明显增高,并且从宫颈炎、低级别CIN、高级别CIN至宫颈癌中有逐渐增多的趋势。这在一定程度上反映了Treg细胞在宫颈癌中参与的逃避免疫监视机制的能力,以及在宫颈癌发生发展过程中所发挥的免疫抑制作用。3. T细胞亚群与HPV感染有一定关系:在HPV阳性宫颈病变组织中,具有免疫抑制作用的Treg细胞及CD8~+T淋巴细胞增多,而具有辅助和诱导作用的CD4~+T淋巴细胞减少。在宫颈癌的发生发展过程中,T细胞亚群与HPV相互作用,可能加剧机体免疫功能的紊乱,促进疾病的发展。