中药黄芪质量评价研究

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黄芪(Astragali radix)来源于豆科药用植物蒙古黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge. var. mongholicus (Bge.) Hsiao或膜荚黄芪Astragalus membranaceus (Fisch.) Bge.的干燥根,属于临床上应用较为广泛的补益类中药,含有多种化学成分,具有多种药理作用。黄芪是我国常用传统中药材之一,其质量关系到用药的安全性和有效性。本文的研究目的是进行黄芪质量评价,研究对象是不同产地的黄芪,包括对其主要有效活性成分的含量测定、指纹图谱研究、DNA分子鉴定等进行研究,以达到对其进行较为系统的质量评价研究,为以后黄芪的质量评价提供参考和依据。本文研究内容包括以下几个方面:(1)应用DNA条形码技术,区分黄芪药材(蒙古黄芪与膜荚黄芪)及其他混伪品,并且从GenBank数据库下载不同样品的序列跟本实验所得到的序列进行比较。研究结果为ITS序列可做为药用植物黄芪及其混伪品的DNA条形码的鉴定。(2)建立UPLC法对不同产地黄芪中6种黄酮类成分槲皮素、山柰酚、毛蕊异黄酮苷、芒柄花苷、芒柄花素、毛蕊异黄酮的含量同时进行测定。6种黄酮类成分在选定的范围内线性关系良好(r≥0.999),平均加样回收率(n=6)在99.60%-101.2%,RSD为1.2%-2.0%。(3)采用与2010版中国药典中测定黄芪甲苷不同的方法,即UPLC法,测定不同产地黄芪药材中黄芪甲苷的含量,所有样品黄芪甲菅含量均大于0.040%;并且采用分光光度计(苯酚-硫酸法)测定黄芪中多糖的含量,结果显示山西产黄芪多糖含量相对较高。(4)采用UPLC-PDA法建立不同产地黄芪药材指纹图谱,得到可以清晰地表达出黄芪药材专属性的特征图谱。(5)应用UPLC-Q-TOF/MS技术结合主成分分析法和正交偏最小二乘判别分析法等化学计量学方法对黄芪及红芪进行分析研究,结果显示,样品之间的总离子流图差异较明显;PCA结果更加直观形象的看出样品之间的联系和区别;根据OPLS-DA/S-Plot分析结果,得到潜在的标记化合物。(6)对黄芪多糖结构组成特点进行研究,得到一个相对分子质量为3.01×105的相对较纯的大分子单一多糖,经过气相色谱分析,该黄芪多糖的组成为L-鼠李糖、D-木糖、D-葡萄糖及D-半乳糖。该黄芪多糖活性初步筛选结果显示,检测浓度为40μg-mL-1时对A/PR/8/34(H1N1)流感病毒神经氨酸酶的具有抑制活性,抑制率为11.36%。
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