运用酶联免疫吸附方法检测HIV抗体的诊断试剂,因其筛选通量大、成本低、操作方便,而仍在艾滋病的初步诊断中被广泛采用。本论文以1型HIV病毒的跨膜蛋白gp41为研究对象,致力于以现代基因工程的方法,利用大肠杆菌原核表达系统,制备出具有良好免疫反应性的HIV-1gp41重组抗原蛋白,初步评价其在HIV-1抗体诊断试剂盒中的应用价值。本论文选取了编码HIV-1gp41中重要抗原表位的基因序列,设计了合适的引物对,进行PCR扩增,将其通过BamH I、Xho I双酶切后与质粒载体E3连接,转化入克隆宿主菌DH5α,抽提得到的重组载体继续转化表达宿主菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达出重组蛋白,再根据重组蛋白含有的His-Tag,使用镍离子亲和柱进行蛋白纯化,最后将纯化、复性后的重组蛋白标记HRP,通过双抗原夹心酶联免疫法检测各种标本,以评价该重组抗原的免疫反应性。实验证明,本论文成功构建了含有HIV-1gp41重要抗原表位序列的表达载体和能够表达重组抗原的表达宿主菌株,并获得了具有较高纯度的目的重组蛋白。该重组抗原蛋白有优良的免疫反应性,在与相应抗体结合时具备良好的灵敏性、特异性和稳定性,且将其运用在检测HIV-1抗体的酶免法诊断试剂盒中时,通过与数个商品化同类试剂盒的比较,体现出了一定的优势,证明其在HIV-1抗体诊断试剂中具有潜在的应用价值。