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禽流感是由A型流感病毒引起的急性高度接触性传染病，特别是鸡对禽流感有较高的易感性。国际兽医局(OIE)已将其列为A类烈性传染病之一。本研究成功地分离到了1株H5亚型高致病性禽流感病毒(HPAIV)，并且从H5亚型AIV中克隆出血凝素基因HA的cDNA，将其分别克隆到pFastBacI载体，在杆状病毒中进行了表达。本研究内容如下：应用鸡胚接种方法成功分离到1株AIV，用血凝试验(HA)和血凝抑制试验(HI)的方法鉴定该株AIV为H5亚型AIV，同时本研究还借助电镜观察，普通RT-PCR，荧光RT-PCR等方法进一步证明该分离株为H5亚型AIV；进行了人工感染鸡的致病力测定，实验表明该H5亚型AIV对鸡具有很高的致死率。参照国内外己发表的AIV基因序列，设计保守性引物，以实验一分离的1株H5亚型AIVmRNA为模板，采用逆转录一聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增了H5亚型AIV血凝素(HA)基因cDNA，将其分别克隆到pUCm-T。通过对重组质粒的酶切鉴定及核苷酸序列测定，表明成功克隆了1株H5AIV的HA全基因，其基因开放阅读框(ORF)全长为1707bp。将该基因片段与其它参考毒株进行了核苷酸序列比较及系统发育分析，结果表明，本研究中分离保存的鸡源H5AIVHA基因与在大陆及香港分离高致病性AIV(HPAIV)的HA基因编码的氨基酸序列具有极高的同源性(95.4％～98.1之间)，且编码的氨基酸在切割位附近均有多个连续碱性氨基酸插入。利用杆状病毒表达载体Bac-to-Bac系统，对克隆得到的血凝素基因HA进行了表达，首先构建了杆状病毒表达质粒pFastBac-H5HA，该质粒经转座和加压筛选后，分离出重组杆状病毒基因组穿梭质粒Bacmid，将其转染sf9昆虫细胞后，筛选出稳定表达H5亚型AIVHA基因的重组杆状病毒。