叶螨属于节肢动物门(Arthropoda)、蛛形纲(Arachinida)、蜱螨亚纲(Acari)、真螨总目(Acariformes)、绒螨目(Trombidiformes)、前气门亚目(Prostigmata)、异气门总股(Eleutherengonides)、叶螨科(Tetranychidae),是一种危害蔬菜、果树、豆科植物和观赏性植物的重要农业害虫。在实行植物检疫过程中,由于不同种类叶螨的形态特征相似度高,因而往往找不到好的鉴别特征。一般来说,叶螨属的叶螨主要是通过雄虫外生殖器阳具端锤的性状来进行鉴定,但是形态学鉴定局限于特定的发育阶段,且对于亲缘关系较近的物种或隐存种区分困难。例如二斑叶螨(Tetranychus urticae Koch)和朱砂叶螨(Tetranychus cinnabarinus Boisduval)具有非常相似的形态特征,在传统叶螨分类研究中常引起分类学家的意见分歧。为了解决形态学鉴定问题,越来越多的分子标记技术被应用于蜱螨鉴定。其中限制性片段长度多态性聚合酶链式反应技术(PCR-RFLP)被认为是有效区分叶螨属种类的鉴定手段。基于DNA序列差异的叶螨鉴定方法相对于传统鉴定方法而言,具有便捷、快速、稳定等特点,其中核糖体DNA应用较为广泛。核糖体DNA主要包括18S、5.8S和28SrRNA及内转录间隔区ITS1和ITS2。由于ITS序列具有种内变异小,种间变异大的特性,为叶螨属鉴定提供了更为可靠的分子标记。本研究通过形态学和分子生物学相结合的鉴定手段,对不同寄主、地理区域的叶螨种类进行了鉴定。旨在探索两项技术的结合是否可以对叶螨属内6个物种(卢氏叶螨Tetranychus ludeni、豆叶螨Tetranychus phaselus、神泽氏叶螨Tetranychus kanzawai,二斑叶螨Tetranychus urticae、截形叶螨Tetranychus truncatus和皮氏叶螨Tetranychus piercei)进行准确鉴定。另外,我们检测和分析了种间ITS序列的差异,综合考虑DNA多态性及酶切片段特异性等特点,最终筛选到3个限制性内切酶(RsaI、DdeI、MfeI)用于建立RFLP图谱。研究表明两项技术的结合能够准确鉴定出这6个物种,且基于ITS构建的系统发育分析结果也支持了形态上鉴定的种,除了外群柑橘全爪螨和桑全爪螨处于同一进化支上,其他物种都以较高的置信度形成一个单系,而且ITS序列在种间显示出较高的多态性,即该基因在叶螨鉴定方面突显出独特的优势。综上所述,分子鉴定方法,相对于传统形态鉴定方法而言,更为简单、快速、可靠和经济。