论文部分内容阅读
目的:近年来,我国前列腺癌发病率有明显增加的趋势,积极开展有关国人前列腺癌发生、发展的分子机制及干预防治研究具有重要意义。目前,前列腺癌的治疗主要是粒子植入等局部治疗和手术、放疗、化疗等局限性前列腺癌根治性治疗,并且根据癌症的分期和患者的状态采取不同的综合治疗方法。由于前列腺癌的异质性,患者能选择的治疗方案十分有限,这就要求我们对前列腺癌的分子特征做进一步的研究,来明确药物的作用靶点,并且寻求天然植物药物来减少患者治疗中的毒副作用。叶黄素作为一种天然植物化学物进入了人们的视线。它广泛存在于含有较多叶绿素的植物体中,是类胡萝卜素的一种。目前已发现叶黄素具有抗氧化,增强机体免疫功能,预防和减少癌症发生和发展等多种生物学功能。本课题以人前列腺癌PC3细胞为研究对象,旨在探究叶黄素对人前列腺癌PC3细胞增殖和凋亡影响的作用机制,为前列腺癌预防及治疗提供新的理论依据。方法:1.采用CCK-8法检测叶黄素对PC3细胞活力的影响;2.倒置显微镜下观察叶黄素药物处理后,PC3细胞形态的变化情况;3.细胞划痕实验观察叶黄素对PC3细胞迁移的影响;4.Transwell实验检测叶黄素对PC3细胞侵袭的影响;5.运用流式细胞术检测叶黄素对PC3细胞周期分布的影响;6.运用流式细胞术(Annexin V-FITC/PI双染法)检测叶黄素对PC3细胞凋亡的影响;7.采用RT-PCR技术检测叶黄素处理的PC3细胞内Bcl-2 mRNA,Bax mRNA的水平变化;8.采用Western blot技术检测叶黄素处理的PC3细胞内凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax的表达情况;结果:1.CCK8法结果显示,不同浓度(20,40,80,120,160μg/ml)叶黄素作用PC3细胞24 h,48 h,72 h后,叶黄素显著抑制PC3细胞的增殖,并呈时间和浓度依赖性。2.细胞形态学观察结果显示随着叶黄素浓度的增加,24 h后细胞形态发生显著变化,有明显凋亡的趋势。3.划痕实验结果表明,叶黄素组与对照组比较均可抑制PC3细胞的迁移,并且具有剂量依赖性,160μg/ml组有非常显著性差异(P﹤0.01)。4.Transwell实验显示,叶黄素组细胞穿过聚碳酸酯膜的数量少于对照组,并且具有剂量依赖性,160μg/ml组有非常显著性差异(P﹤0.01)。5.流式细胞术结果表明,不同浓度叶黄素作用于PC3细胞48 h后,可以将细胞生长周期阻滞在G0/G1期。6.流式细胞术结果表明,叶黄素作用于PC3细胞48 h后,随着浓度提高,细胞凋亡率明显增高,当浓度为120μg/ml时,凋亡率最高可达36.1%。7.RT-PCR实验结果显示,叶黄素可在转录水平上下调Bcl-2 mRNA的水平和上调Bax mRNA的水平,并且呈剂量依赖性。8.Western blot实验结果显示,叶黄素可以使抗凋亡相关蛋白Bcl-2表达下降,促凋亡蛋白Bax表达上升,并且呈剂量依赖性。结论:叶黄素能够抑制人前列腺癌PC3细胞增殖并促进其凋亡,其发挥抗肿瘤作用的机制可能与阻滞细胞周期,抑制细胞迁移侵袭,调节凋亡相关蛋白表达和影响基因水平有关。