喜树碱的分析方法及提取纯化工艺研究

来源 :吉林农业大学 | 被引量 : 8次 | 上传用户:huier0001
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本论文以喜树叶为原料,研究了喜树碱的提取纯化工艺,探索出一条提取率高、纯化效果好的工艺路线,对喜树碱的分析方法进行研究,建立了适用性强、稳定性好的喜树碱的高效液相色谱分析方法。确定了喜树碱的索氏提取—高效液相色谱检测方法:以甲醇为提取溶剂,提取温度为80℃,提取时间为6h作为样品分析前处理方法,采用SinoChrom ODS-BP色谱柱,检测波长为254nm,乙腈/水(40∶60,V/V)为流动相的HPLC分析方法。该方法在3.55~71μg mL-1的浓度范围内线性关系良好,平均加标回收率为95.4%,相对标准偏差RSD为2.52%。研究了浸渍法、回流法以及碱法对喜树叶中喜树碱的提取工艺,通过单因素及正交实验分析法对提取工艺进行优化,确定了浸渍法最佳提取条件为:65%的甲醇,料液比为1∶8,提取48小时,经验证该条件下喜树碱平均提取率为0.318‰;回流法最佳提取条件为:65%的甲醇,料液比为1∶10,提取1h,提取温度为70℃,提取1次,经验证该工艺条件下喜树碱平均提取率为0.490‰;对王洋等提出的碱法提取工艺进行了验证,该工艺喜树碱的平均提取率为0.0746‰。将三种提取方法进行比较可以看出:回流法提取时间短,提取效率高,提取液处理简便,工艺稳定可靠,因此实验采用回流提取工艺。通过静态吸附-解吸实验,从五种常用大孔吸附树脂中筛选出具有较大吸附量与解吸率的AB-8树脂作为层析柱的填料,AB-8树脂对喜树碱的静态吸附量为16.68mg g-1,95%乙醇静态解吸率为92.4%;使用喜树碱的粗提液进行纯化工艺研究,确定最佳吸附条件为:上样液浓度为0.175mg mL-1,上样液不调pH值,吸附流速为2BV h-1,平衡吸附5h;最佳洗脱条件为:洗脱液为95%乙醇,洗脱流速为1BV h-1,洗脱量为8BV,在该工艺条件下,洗脱物中喜树碱纯度为7.43%,洗脱率达到83.1%。
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