论文部分内容阅读
目的:探索藻酸钠作为冷冻保护剂对小鼠卵巢冷冻保存的影响。 方法:取4-5周龄CD1雌性小鼠双侧卵巢并于PBS中切割为1×1×1mm3大小,随机分为六组:空白对照组A组(DMSO+EG);实验组B组(DMSO+EG+0.05%藻酸钠);实验组C组(DMSO+EG+0.1%藻酸钠);实验组D组(DMSO+EG+0.15%藻酸钠);实验组E组(DMSO+EG+0.2%藻酸钠);新鲜对照组F组。卵巢组织于室温条件下,在冷冻液1中渗透平衡15分钟,于冷冻液2中渗透平衡5分钟。用镊子抓取组织块,贴附于20ml注射器针头上,直接投入50ml装有液氮的离心管中,置于液氮中冷冻保存7天。再从液氮中取出注射器针头,直接投入预热为37℃1mol/L蔗糖的复苏液中复苏2分钟,依次置于蔗糖浓度为0.5、0.25、0.125mol/L的复苏液中各复苏5分钟,结束后置于PBS中洗3次,每次5分钟。取出组织块,用10%中性甲醛固定,苏木素-伊红染色计数卵泡存活率;TUNEL染色计数卵泡凋亡率。采用SPSS17.0软件进行统计学分析,各级卵母细胞的存活率用方差分析对比,P<0.05为差异具有统计学意义。 结果:HE染色:各组间存活卵泡数比较,新鲜对照组的存活率最高,为76.17%;空白对照组和各实验组对比,随着添加藻酸钠浓度的增加,卵泡存活率呈现先上升后下降的趋势,存活率分别为56.22%、46.28%、65.10%、67.29%、41.15%,添加浓度为0.15%-0.1%的藻酸钠可提高卵泡的存活率。TUNEL染色:与HE染色结果相对应,新鲜对照组的卵泡凋亡率最低,为26.32%,空白对照组和各实验组相比,随着添加藻酸钠浓度的增加,卵泡凋亡率呈现先下降后上升的趋势,凋亡率分别为48.48%、54.39%、38.36%、33.87%、58.93%,藻酸钠浓度的增加可适度降低卵泡凋亡率,但存在浓度阈值,藻酸钠浓度超过0.1%-0.15%后,卵泡凋亡率显著性增高。 结论:DMSO+EG+0.05%-0.1%藻酸钠作为冷冻保护剂冻存卵巢组织的效果优于添加其它浓度藻酸钠,且优于未添加藻酸钠的效果。