乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)感染是最常见的感染性疾病之一.乙肝疫苗作为一种免疫预防的手段,已经取得重大的成就.通过对抗原的改造和/或抗原递呈途径的改变是消除机体免疫耐受的有效途径.从分子免疫角度看,HBsAg实际上是由3种表位组成,即Th表位、CTL表位和B细胞表位组成.然而,DNA免疫不能确定外源Th表位的免疫促进作用是其直接作用,还是促进重组蛋白的表达来实现的;亚显性表位免疫应答较差也需要排除其在蛋白表达水平相对较低的可能性;PADRE在辅助完整HBV S基因有较好的效果,其辅助亚显性HBV S基因的效果也值得探讨;此外该项目需向应用和开发研究延伸等因素.有必要对重组HBV S基因载体进行蛋白质表达研究.为此,该研究在前期实验基础上,补充构建PADRE辅助的亚显性重组载体,选用毕赤酵母表达系统,进行蛋白质表达研究.结论:1.该研究构建的重组酵母载体序列正确,均能在毕赤酵母表达系统中成功表达,具有较好的重复性和稳定性.为进一步研究提供了良好的基础;2.PADRE促进抗体应答作用可能部分与促进蛋白质表达水平有关.表位MTE5可能有直接促进作用;3.α决定簇缺失的重组蛋白抗原性弱,仅被复合单抗检出,与前期DNA免疫结果一致,进一步支持亚显性表位免疫具有较好的研究和应用前景.4.然而该研究中表达的蛋白质水平不十分高,不能分泌.这不利于重组蛋白纯化和进行蛋白质水平的免疫活性研究.