氯菊酯及其对映体对斑马鱼内分泌干扰的研究

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环境内分泌干扰物能够模拟内源性荷尔蒙的功能,达到干扰生物内分泌系统的作用,关于这方面的研究也越来越受到重视。人工合成的农药是自然界中内分泌干扰物质的主要来源之一。目前所使用的农药中有25%是手性的,而且这个比率还在不断上升,但是关于手性农药对生物内分泌系统干扰作用的对映体选择性却甚少有研究。为此,本课题旨在建立有效检测环境内分泌干扰物的实验体系,并研究手性农药氯菊酯及其对映体对斑马鱼内分泌系统干扰作用的对映体选择性,为手性农药的合理使用提供理论依据。在内分泌干扰效应检测体系的建立中,分别采用不同浓度雌激素(E2)作为标准环境内分泌干扰物处理雄性斑马鱼,在暴露不同时间后,利用RT-PCR分析雌激素对不同组织中卵黄蛋白原1(Vtg1)、卵黄蛋白原2(Vtg2)、雌激素受体α(ERα)基因的表达量。实验结果显示外源性雌激素处理能够显著改变雄性斑马鱼肝脏中各个基因的相对表达量,说明在检测环境内分泌干扰物的实验中,可以将斑马鱼肝脏中相关基因作为生物标志物。在氯菊酯及其对映体干扰作用研究中,实验利用手性柱分离氯菊酯的四个对映体,利用RT-PCR分析氯菊酯不同对映体对斑马鱼肝脏中相关基因表达量的影响,结果显示500 ng/l氯菊酯及其对映体处理2天能够影响雄性斑马鱼的内分泌系统,并且这种基因表达诱导方式同100ng/L雌激素诱导类似;此外,对映体之间干扰效果也存在选择性差异。结果提示氯菊酯对生物的内分泌干扰效应存在对映体选择性,将未拆分的手性农药直接使用,对生物存在潜在的威胁。在氯菊酯对映体对斑马鱼蛋白表达影响的研究中,根据前期研究的结果,实验选用trans氯菊酯的两个对映体处理斑马鱼,进而利用2D技术分离其肝脏中的总蛋白,寻找其中的差异蛋白并用质谱技术鉴定。结果显示trans氯菊酯对蛋白表达的诱导存在对映体选择性,本次实验筛选出的SULT和MAPKAPK5蛋白,有必要在今后做进一步研究。总之,本研究认为在对手性物质的评价中,应该将对映体选择性包含在内,此外,对于对映体选择性的机理有待进一步研究。
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