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为预防和治疗细菌性疾病,抗菌药物被广泛的应用于生物学领域,在畜禽养殖业中抗菌药物更是作为饲料添加剂被大量使用,导致细菌耐药现象变得严重,给细菌性疾病的防治带来极大挑战。大肠杆菌作为环境和机体共生菌,同时又是病原菌,其在耐药性传播方面的重要作用一直受到了人们的广泛关注。本研究根据大肠杆菌pho A持家基因序列设计引物,建立对牛源大肠杆菌的PCR检测方法,测序结果显示,扩展片段与大肠杆菌pho A持家基因相似性高,达99.7%,根据建立的PCR检测方法对临床分离菌进行检测,鉴定出105株牛源大肠杆菌。大肠杆菌pho A持家基因PCR检测方法,与传统鉴定方法相比具有灵敏度高,特异性强,检测时间短等特点。本研究参照CLSI推荐的Kirby-Baue法对105株分离菌进行药物敏感性试验。实验结果显示:分离菌对22种抗菌药物均产生不同程度的耐药性,对7种抗菌药物的耐药率超过50%,其中RA(84.76%),AMP(73.58%),TC(69.52%),SIZ(59.05%)的耐药情况严重,而对AMK(84.76%),OFL(80.00%),CIP(76.92%)和NOR(76.19%)等药物较敏感,这些敏感药物多为兽医临床较少使用的抗菌药物。多重耐药指数的计算结果显示,不同地区其值存在显著性差异。分离菌呈现多重耐药现象,且不同地区耐药谱系不同,105株分离菌表现出21种耐药谱,其中最少耐1种药物,最多耐21种药物。分离菌对9种抗菌药物的主要耐药表型有15种,其中AMP+S+TC+C+SIZ和AMP+SIZ耐药表型所占比例最大。由此可见,检测地区的牛源大肠杆菌多重耐药现象较严重,耐药谱广,耐药现状复杂。本研究采用PCR方法检测耐药基因,实验结果证明:在被检测的19种耐药基因中,只有bla CMY-2基因没有检测到,其中sul3基因检出率最高(28.57%),qeq A基因检出率最低(4.76%),且不同地区耐药基因的携带率存在差异。通过耐药性和耐药基因一致性分析可知,分离菌株中存在有耐药性但不携带耐药基因的情况;同时也存在携带耐药基因但不表现耐药表型的情况。多重耐药菌株的出现势必对牛大肠杆菌病的防治带来困难,临床用药时应选择敏感药物,防止耐药性的产生。本研究采用微量稀释法和琼脂平板稀释法,分别测定环丙沙星和氧氟沙星对14株临床分离牛源大肠杆菌敏感株的MIC和MPC,计算和SI。结果显示氧氟沙星和环丙沙星的MIC90分别为0.47μg/ml和1.14μg/ml。以不同浓度MIC为基线测定2种药物对大肠杆菌MPC,结果显示氧氟沙星和环丙沙星对牛源大肠杆菌敏感菌株的MPC90范围分别为0.13~4.11μg/ml和0.96~32.22μg/ml,氧氟沙星的SI(2~8)低于环丙沙星的SI(8~32)。由此可见氧氟沙星的抗菌活力优于环丙沙星,且防突变能力也强于环丙沙星。综上所述,本研究检测的黑龙江部分地区的牛源大肠杆菌的耐药情况较为严重,出现多重耐药菌株,且携带多种耐药基因。在防治细菌性疾病时,应在药敏试验的指导下选择抗菌药物,建立以MSW为理论依据的给药策略,以防止耐药突变菌的产生及优势生长。