粘附连接是E-cadherin（E-钙粘蛋白）介导的上皮细胞间粘附结构，其胞外部分是反式相互作用的E-钙粘蛋白，胞内通过p120-连环蛋白（p120-catenin）、β-连环蛋白（β-catenin）结合到肌动蛋白细胞骨架上。粘附连接不仅将相邻细胞依次连接起来，维持上皮细胞正常的形态和极性，而且参与细胞间及胞内的信号转导，具有抑制肿瘤发生和转移的功能。Ras家族小分子量G蛋白对E-钙粘蛋白有重要的调节作用，Rap1调控E-钙粘蛋白介导的粘附连接的形成和定位，但此过程中Rap1作用的下游信号通路仍是未知的。有文献报道抑制H-Ras的活性能增强E-钙粘蛋白的表达，小鼠胚胎成纤维细胞缺乏H-Ras时表现出较低的增殖和迁移能力，但H-Ras对E-钙粘蛋白是否具有调节作用尚未定论。为阐明Rap1和H-Ras能否协同或拮抗地调节E-钙粘蛋白介导的粘附连接的形成，我们使用Ca²⁺开关模拟粘附连接解体和重建模型，利用GST-Pull down技术研究了Rap1和H-Ras活性在粘附连接重建过程中的变化规律，发现MCF-7细胞中Rap1和H-Ras在Ca²⁺饥饿引起的粘附连接解离时均被激活。此外，通过Co-IP技术研究了Rap1和H-Ras在粘附连接重建过程中相互作用蛋白的变化情况，通过FRET技术研究了Rap1和H-Ras在细胞内被激活的位置，研究发现，Rap1和H-Ras的激活均与Ca²⁺开关实验介导的粘附连接重建有关。Rap1调节E-钙粘蛋白的候补下游因子主要是一些细胞骨架蛋白、细胞骨架调节蛋白以及小分子量G蛋白的GAPs，H-Ras调节E-钙粘蛋白的下游因子可能也包括一些细胞骨架蛋白。Rap1起始活化时核周围的活化水平高于细胞膜处，细胞膜和胞质中的H-Ras活性化水平均在粘附连接解体时上升，粘附连接重建时下调。通过本课题的研究，我们能够进一步了解Rap1和H-Ras之间的联系以及调控E-钙粘蛋白介导的细胞间粘附连接的分子机理。