在过去四十年里,肿瘤治疗的手段发生了很大的改变。常规或传统的治疗方法包括手术、放疗和化疗,它们是肿瘤治疗的三大支柱;然而在近年来,免疫疗法在肿瘤治疗中变得愈加重要。溶瘤病毒疗法自1991年在Science杂志上报道以来,在过去的二十多年里经过科学家们的不断改造和发展,成为目前极有前景的肿瘤治疗类药物之一。现阶段已有20多种溶瘤病毒类药物进入临床阶段,其用于肿瘤治疗的安全性和有效性已得到证实。就临床试验结果显示,溶瘤病毒单药治疗肿瘤的效果仍然有限,这主要是由于肿瘤的异质性及复杂的调控机制所导致。目前主要有两大类提高溶瘤病毒肿瘤治疗效果的方法:第一类是从病毒本身出发对其进行基因工程改造,使其携带外源加强型基因,如美国FDA批准上市的首个溶瘤病毒T-VEC携带了 GM-CSF基因;第二类则是与其他肿瘤治疗方式联合,如和小分子抑制剂、放化疗试剂或免疫检验点阻断剂等联合治疗肿瘤。在这其中小分子抑制剂因具有作用范围广、易到达靶点位置、纯度高及可口服等优点在联合溶瘤病毒时展现出多种优势。目前已有多种溶瘤病毒联合小分子抑制剂的研究正在开展中,溶瘤病毒的联合治疗策略是大势所趋。本研究旨在筛选到可作为溶瘤病毒oHSV-1增效剂的小分子抑制剂,解决oHSV-1对某些病毒抵制型肿瘤治疗效果不好的问题。为此,开展了以下工作:首先利用台盼蓝染色法建立体外oHSV-1肿瘤杀伤效果评估平台,在38株不同的肿瘤细胞上评估其溶瘤效果,并从中筛选出6株病毒抵制型肿瘤细胞。根据作用互补原理,我们选择一批可能与溶瘤病毒杀伤机制互补的小分子抑制剂用于后续研究。随后我们利用WST-1细胞增殖和细胞毒性检测法筛选出2种可提高oHSV-1对抵制型肿瘤细胞杀伤效果的小分子抑制剂:Rapamycin和PF-573228。本研究重点探索了 oHSV-1与Rapamycin的联合治疗效果,并在人子宫内膜腺癌和人子宫颈癌荷瘤动物模型中证实两者联合治疗的效果显著优于单药治疗。最后利用Wesertern blotting和RT-qPCR等方法我们初步探索了 oHSV-1和Rapamycin联合治疗的作用机制,结果表明可能与Rapamycin抑制干扰素介导的抗病毒应答相关,但具体调控机制有待进一步研究。综上所述,本研究筛选到了 2种可以提高溶瘤病毒oHSV-1对病毒抵制型肿瘤细胞治疗效果的小分子抑制剂,并在体内外模型上验证了 Rapamycin可提高oHSV-1在病毒抵制型肿瘤上的治疗疗效。此外,我们还对联合作用机制进行了初步的探索。该研究为未来临床上溶瘤病毒oHSV-1联合小分子抑制剂治疗肿瘤的应用奠定了坚实的基础。