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目的明确龟鹿二仙胶含药血清对SD大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性、成骨分化及MAPK/ERK1/2信号通路中关键蛋白与基因m RNA表达水平的影响;旨在从体外细胞水平与MAPK/ERK1/2信号通路角度揭示龟鹿二仙胶对骨髓间充质干细胞成骨分化的干预作用及其调控机制。方法1.龟鹿二仙胶含药血清的制备将SPF级8周龄的SD大鼠60只随机分为含药血清组和空白血清组各30只,含药血清组按3.15g/kg/d的龟鹿二仙胶药液进行灌胃,空白血清组采用等剂量蒸馏水灌胃。连续灌胃7d后进行腹主动脉采血制备含药血清。2.龟鹿二仙胶含药血清对骨髓间充质干细胞增殖活性最佳作用时间的筛选将F3代细胞分为5组,加入10%龟鹿二仙胶含药血清分别干预12h、24h、48h、72h、96h后,酶标仪测定450 nm波长处的吸光度值。根据CCK-8最高的吸光度值实验结果对应组别的干预时间点作为本实验最佳干预时间点。3.骨髓间充质干细胞诱导成骨分化的干预与指标检测将F3代细胞分为胎牛血清组、空白血清组、龟鹿二仙胶含药血清组和经典诱导组,采用各组条件培养基进行成骨诱导分化干预,干预7d后检测各组细胞培养液中ALP活性水平;干预14d后行茜素红染色检测和定量分析;干预14d后RT-q PCR法检测ALP、Runx2、ETS1、PPARγm RNA表达水平;干预14d后Western-Blot法分别检测胎牛血清组、空白血清组、龟鹿二仙胶含药血清组和经典诱导组以及通路抑制剂干预后龟鹿二仙胶含药血清加MAPK抑制剂组、MAPK抑制剂组和龟鹿二仙胶含药血清组细胞中ALP、Runx2、ETS1、PPARγ、collagenⅠ、P-ERK1/2蛋白的表达水平。结果1.10%龟鹿二仙胶含药血清对骨髓间充质干细胞增殖活性的影响根据CCK-8实验结果,以10%龟鹿二仙胶含药血清干预72h后对BMMSCs的促增殖活性作用显著（P<0.01）,后续干预实验均采用10%龟鹿二仙胶含药血清进行,干预细胞期间72h换液一次。2.龟鹿二仙胶含药血清对骨髓间充质干细胞ALP活性的影响与胎牛血清组、空白血清组相比,龟鹿二仙胶组含药血清干预7d,可提高骨髓间充质干细胞中碱性磷酸酶的活性（P<0.05）,但其提高骨髓间充质干细胞中碱性磷酸酶的活性的能力较经典诱导组低（P<0.05）。3.龟鹿二仙胶含药血清对骨髓间充质干细胞成骨分化矿化结节形成的影响诱导14d后,与胎牛血清组和空白血清组比较,龟鹿二仙胶含药血清干预骨髓间充质干细胞成骨矿化结节明显增多。茜素红染色矿化结节定量分析结果也显示龟鹿二仙胶含药血清组成骨分化能力强于胎牛血清组和空白血清组（P<0.05）。4.各组ALP、Runx2、ETS1和PPARγm RNA表达比较与胎牛血清组和空白血清组比较,龟鹿二仙胶含药血清组和经典诱导组细胞中ALP、Runx2、ETS1 m RNA表达明显升高（P<0.05）;与空白血清组比较,龟鹿二仙胶含药血清组和经典诱导组细胞中PPARγm RNA表达下调（P<0.05）。5.各组ALP、collagenⅠ、Runx2、ETS1、PPARγ和P-ERK1/2蛋白表达与空白血清组比较,龟鹿二仙胶含药血清组和经典诱导组细胞中P-ERK1/2、ALP、collagenⅠ和Runx2蛋白表达水平均升高（P<0.05）;与空白血清组和胎牛血清组比较,龟鹿二仙胶含药血清组细胞中ETS1蛋白表达水平升高（P<0.05）;与空白血清组和胎牛血清组比较,龟鹿二仙胶含药血清组和经典诱导组细胞中PPARγ蛋白表达水平明显下调（P<0.05）。通路抑制剂干预后,与龟鹿二仙胶含药血清+MAPK通路抑制剂组和MAPK通路抑制剂组对比,龟鹿二仙胶含药血清组中P-ERK1/2、ALP、collagenⅠ、Runx2和ETS1蛋白表达水平显著升高（P<0.05）;同时MAPK通路抑制剂组中PPARγ蛋白表达水平显著高于龟鹿二仙胶含药血清组（P<0.05）。结论龟鹿二仙胶含药血清通过上调MAPK/ERK1/2/ETS1信号通路相关因子ALP、Runx2、ETS1、collagenⅠ和P-ERK1/2的表达,下调PPARγ表达,激活了MAPK/ERK1/2/ETS1信号通路,促进BMMSCs向成骨细胞分化。