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手术、放疗、化疗和免疫治疗是目前治疗恶性肿瘤的四大主要手段。以树突状细胞（Dentritic cell，DC）为核心的肿瘤免疫治疗是近年来研究热点之一。研制DC/肿瘤杂交细胞疫苗输注体内用于治疗肿瘤的方法已进入临床实践阶段。然而，DC/肿瘤杂交细胞疫苗的融合效率及活性是直接影响其在体内的生物活性及治疗疗效的关键因素。利用聚乙二醇（Polyethyleneglycol，PEG）法诱导细胞融合方法简单，经济，可操作性强，已被广泛采用。但是由于该方法存在融合率不理想；PEG的化学毒性可降低DC/肿瘤杂交细胞疫苗的活性，融合细胞稳定性差等导致DC/肿瘤杂交细胞疫苗治疗效果不佳的可变因素，因此，探索提高融合效率，增强DC/肿瘤杂交细胞疫苗的抗肿瘤效应的新方法具有重要的研究意义。Ⅰ型胶原蛋白（Collagen Ⅰ，CⅠ）是细胞外基质的一种结构蛋白质。它可使磷脂质分子紧密交联，抵抗细胞表面分子张力，从而达到修复受损细胞膜的作用；还可调节细胞外微环境稳态，具有传递细胞信号及维持细胞膜完整性的功能。本研究探索了一种新型融合方法，即在PEG诱导细胞融合后加入CⅠ，以提高融合效率、增强细胞稳定性，从而激活更强的T细胞反应，产生有效的抗肿瘤作用。研究结果表明PEG联合CⅠ诱导细胞融合的新方法，可有效提高融合率，增加DC/肿瘤杂交细胞疫苗的活性及稳定性，从而提高其诱导T细胞活化的能力。本研究为研制高融合率和高活性的DC/肿瘤杂交细胞疫苗提供了新方法，为肿瘤生物靶向治疗提供了新技术。目的：探索基于PEG联合CⅠ新方法诱导的DC/B16黑色素瘤杂交细胞疫苗的融合效率及活性，并进一步验证该杂交细胞疫苗抗黑色素瘤的作用及其机制。方法：运用PEG联合CⅠ的新方法制备DC/B16杂交细胞疫苗（PEG/CⅠ-DC/B16），通过流式细胞术检测PEG/CⅠ-DC/B16表面分子表达情况；通过T细胞增殖实验和细胞内细胞因子检测，分析经PEG/CⅠ-DC/B16活化后T细胞的增殖能力和分泌IFN-γ的情况；PKH26/PI染色法检测PEG/CⅠ-DC/B16诱导T细胞杀伤靶细胞的能力。酶联免疫吸附试验（Enzyme-linkedimmunosorbent assay，ELISA）检测经PEG/CⅠ-DC/B16治疗后，荷瘤小鼠血清中IgG的量。最后采用黑色素瘤小鼠动物模型验证DC/B16融合细胞杂交疫苗体内抗肿瘤作用及其机制。结果：与单独PEG法制备的DC/B16杂交细胞疫苗（PEG-DC/B16）相比，基于PEG联合CⅠ的新方法可诱导出高融合率、高活性的DC/B16杂交细胞疫苗，PEG/CⅠ-DC/B16高表达CD80、CD86、MHC-Ⅱ，表明其具有较强的抗原呈递和启动T细胞免疫应答的功能；T细胞增殖实验表明PEG/CⅠ-DC/B16可有效促进T细胞增殖活化。PEG/CⅠ-DC/B16诱导的T细胞可分泌高水平的IFN-γ，对B16细胞有较明显的杀伤作用。PEG/CⅠ-DC/B16皮下注射治疗黑色素瘤小鼠，有效抑制黑色素瘤生长并延长荷瘤小鼠生存期。该杂交细胞疫苗是通过降低CD4+CD25+FoxP3+调节性T细胞（Regulatory T cells，Tregs）和髓系来源的抑制性细胞(Myeloid-derivedsuppressor cells，MDSCs)的水平、促进体内分泌IgG、促进肿瘤细胞凋亡和抑制肿瘤细胞增殖等机制来发挥抗黑色素瘤作用。结论：基于PEG联合Ⅰ胶原蛋白诱导DC和肿瘤细胞融合的新方法可提高细胞融合率，加强DC/肿瘤杂交细胞疫苗活性。这种高融合率的DC/B16杂交细胞疫苗诱导的抗肿瘤作用得到明显改善。