目的探讨鲜地黄的真空冷冻干燥条件,确立地黄的真空冷冻干燥工艺、对冻干地黄进行质量评价和对其降糖有效部位进行初步筛选。本论文的具体内容分为三部分,具体如下:(1)对鲜地黄的真空冷冻干燥的各项参数进行系统的考察,确定其真空冷冻干燥的工艺。(2)采用性状、显微、理化等方法建立冻干地黄的鉴别方法;依据中国药典2010版一部附录有关方法进行水分、灰分、重金属、砷盐、农药残留的检查;采用高效液相色谱法研究冻干地黄、生地黄指纹图谱来达到鉴别和控制其质量;测定冻干地黄药材中的微量元素、梓醇、毛蕊花糖苷的含量,制定冻干地黄的质量评价标准。(3)比较冻干地黄不同部位提取物对α-葡糖糖苷酶的抑制作用,对其进行降体外糖有效部位的初步筛选;比较冻干地黄不同部位提取物对四氧嘧啶致糖尿病小鼠的血糖血脂的影响,对其进行体内降糖有效部位的进一步筛选。方法1.以地黄中梓醇、毛蕊花糖苷两种环烯醚萜类成分及水分含量为指标,通过单因素试验,考察地黄真空冷冻干燥工艺中影响品质的主要因素;2.采用显微鉴别和薄层色谱法对不同批次的冻干地黄进行鉴别;3.依照2010版《中国药典》附录IX对不同批次的冻干地黄其进行水分、总灰分、酸不溶性灰分检查;采用火焰原子吸收光谱法和原子双道荧光光度计法测定不同产地冻干地黄中的Pb、Cd、Cu、As和Hg 5种重金属和有害元素的含量;采用气相色谱法,对不同产地冻干地黄中的有机氯农药的残留进行检测;4.采用高效液相色谱法,生成高效液相色谱图,导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统研究版”(2004A)软件中进行相似度评价;5.采用高效液相色谱法测定不同产地冻干地黄中梓醇和毛蕊花糖苷的含量;采用火焰原子吸收法测定不同产地冻干地黄中微量元素K、Mg、Ca、Na、Mn、Fe、Cu和Zn的含量;6.采用紫外—可见分光光度法研究冻干地黄不同部位提取物对α-葡糖糖苷酶的抑制作用;7.以阿卡波糖为阳性对照,观察冻干地黄不同部位提取物对四氧嘧啶致糖尿病小鼠的饮食量、饮水量及体重以及血糖和血脂的影响。结果1.初步确定的冻干地黄冷冻干燥的最佳工艺为物料切片方式横切,切片厚度2.5~4mm厚片;物料厚度双层;预冻条件-30℃,2h;干燥时间28h,真空度5Pa,物料温度从-40℃到15℃,冷阱温度是-80℃;用材质PV+PE的真空包装,封口温度为中温,封口时间为3s,真空时间为20~30s,真空度为-0.1MPa。2.在显微镜下观察到了分泌细胞、木栓细胞、薄壁细胞、具缘纹孔导管、网纹导管;在冻干地黄薄层色谱中检出了梓醇和毛蕊花糖苷;3.冻干地黄中的水分、灰分、酸不溶性灰分、有害元素及农药残留的含量均不超过限量规定。4.采用HPLC法得到的色谱图通过相似度评价系统确立了8个共有峰,建立了冻干地黄的指纹图谱,10批药材的指纹图谱与对照指纹图谱的相似度在0.977~0.998,所建立的方法简便、可靠。5.采用HPLC法测定不同产地冻干地黄中梓醇和毛蕊花糖苷的含量,发现基线平稳,各组分分离度良好。采用FAAS法测定冻干地黄中各微量元素,该方法准确度、重复性和回收率良好,不同产地冻干地黄药材各微量元素存在差异。6.采用UV法测定冻干地黄中不同部位提取物对α-葡萄糖苷酶均有抑制作用,其中正丁醇部位、水部位和水提取物部位表现出较高的酶抑制活性。7.以阿卡波糖为阳性药物,用四氧嘧啶造模,发现各给药组口服给药两周后均可不同程度的降低糖尿病小鼠的饮食量和饮水量,体重均不同程度的增加,血糖均不同程度的降低,能不同程度的降低糖尿病小鼠餐后血糖值,改善糖耐量,升高HDL-含量,降低TG、TC含量。结论经实验初步确定的地黄的真空冷冻干燥工艺稳定性良好;冻干地黄产品的各项指标符合《中国药典》2010版的各项规定;建立的测定冻干地黄药材中的有害元素、微量元素、梓醇、毛蕊花糖苷含量的方法准确度高,灵敏度和重复性良好,建立的冻干地黄指纹图谱的方法简便、可靠,可用于制定冻干地黄的质量评价标准;地黄的体外和体内研究表明其各部位均有降糖作用,体外研究发现各部位对α-葡萄糖苷酶的抑制率由高至低依次为:醇提物水部位、阿卡波糖、地黄粗多糖、水提取物部位、醇提取正丁醇部位、醇提物乙酸乙酯部位、醇提物石油醚部位;体内研究发现冻干地黄正丁醇部位提取物能显著降低血糖,改善糖耐量,各治疗组均能提高HDL-C含量,降低TC、TG的含量。