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卵清蛋白（Ovalbumin，OVA）是禽蛋的重要营养成分，也是免疫学研究中最常用的模式抗原蛋白。尽管OVA在鸡输卵管中大量分泌表达，但OVA基因在培养的动物细胞中表达水平较低，从而影响OVA基因作为DNA疫苗的研究应用。通过SignalP3.0server软件分析，发现OVA基因缺乏典型的信号肽序列，这是否是OVA在非输卵管细胞表达水平低的原因，目前尚不清楚。为此本文利用表达水平较高的人CD14基因的信号肽序列与OVA融合，以提高OVA在培养细胞中的分泌表达水平。取鸡输卵管上皮细胞，用Trizol法提取总RNA，RT-PCR反转录得到cDNA。利用上游引物OVA-F和下游引物OVA-R-s，以cDNA为模板通过PCR扩增出非融合OVA基因，而后再利用含有CD14信号肽序列的重叠上游引物CD14sp-OVA-F1和CD14sp-OVA-F2以及下游引物OVA-R-s，以扩增出的T-OVA质粒为模板，通过两次PCR分别扩增融合人CD14信号肽序列的OVA基因，将该基因片段命名为CD14sp-OVA。将融合OVA基因和非融合OVA基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1A中，构建成CD14信号肽引导的OVA真核分泌表达载体pcDNA-CD14sp-OVA以及阴性对照载体pcDNA-OVA。经磷酸钙介导，将两种真核表达载体的小抽提质粒分别转染人胚胎肾细胞HEK293T细胞进行表达，将表达培养基用三氯乙酸（TCA）法浓缩蛋白，经SDS-PAGE电泳分离蛋白，将蛋白转印到硝酸纤维滤膜上，用Western blot法检测OVA基因在细胞中的表达水平。结果表明，PCR扩增的OVA基因和CD14sp-OVA基因序列经上海生共测序分析结果与GenBank的参考序列一致，同时融合人CD14信号肽的OVA基因在HEK293T细胞的表达，经Western blot鉴定结果表明融合的OVA基因的表达水平明显高于非融合OVA基因表达水平，这说明人CD14信号肽明显提高OVA基因在HEK293T细胞的表达水平。该研究结果为OVA基因作为DNA疫苗的模式抗原的研究创造了有利条件。