SDF-1修饰的载Fe3O4液态氟碳纳米粒的制备及其体外实验

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目的:制备一种由基质细胞衍生因子(SDF-1)修饰的并同时包裹磁性氧化铁颗粒(Fe3O4)和液态氟碳全氟己烷(PFH)的靶向多功能高分子纳米粒(nanoparticles,NPs),检测其一般性质。观察所制得的SDF-1/Fe3O4/PLGA/PFH纳米粒其体外超声及光声成像特点,探讨其多模态成像的能力,观察体外靶向实验效果,初步分析其体外靶向能力。方法:采用双乳化法制备纳米粒,SDF-1通过硫醚键连接于PLGA外壳,可制得具有靶向作用的高分子造影剂。光学显微镜及扫描电镜观察纳米粒形态,激光共聚焦显微镜观察纳米粒表面SDF-1的连接情况,Malvern测径仪检测其粒径大小、分布及zeta电位,原子吸收分光光度法检测样品中铁的含量,紫外-可见分光光度法检测靶向纳米粒的吸收光谱。建立成像模型,应用光声成像仪,在波长为680nm的脉冲激光激发下,分别检测SDF-1/Fe3O4/PLGA/PFH、Fe3O4/PLGA/PFH、SDF-1/PLGA/PFH、空白PLGA 4组纳米粒在不同浓度下的光声图像,并检测相应光声信号值(PA);超声诊断仪观察不同浓度及不同机械系数(MI)下的靶向纳米粒的超声成像情况,用DFY定量仪分析不同MI值和不同浓度下成像图像的回声强度值(EI);设置SDF-1/Fe3O4/PLGA/PFH纳米粒组和空白PLGA纳米粒组,同时放入水浴锅,从37℃加热至65℃,超声诊断仪记录两组纳米粒加热前及加热至56℃时的超声影像,计算相应SDF-1/Fe3O4/PLGA/PFH纳米粒的EI值,光镜下拍照记录纳米粒变化过程;全自动荧光显微镜下观察靶向纳米粒被舌鳞癌SCC-15细胞吞噬情况;流式细胞仪初步定量检测靶向纳米粒与SCC-15细胞的靶向结合能力。结果:制备的靶向纳米粒溶液肉眼观呈深棕色,镜下见其形态规则,分散良好,呈圆球形,表面有大量散在的孔洞形成。其平均粒径为(586.48±124.70)nm,平均zeta电位为(-21.5±2.17)m V。原子吸收分光光度法测得样品中铁的含量为35.74μg/m L。紫外-可见分光光度法检测得靶向纳米粒在300~840nm波长范围内出现了两个稍强吸收波峰,分别位于556nm和623nm附近。SDF-1/Fe3O4/PLGA/PFH和Fe3O4/PLGA/PFH纳米粒组可检测到明显的光声信号,且光声信号随着纳米粒浓度的升高而增强(P<0.05);靶向纳米粒超声信号随着超声诊断仪MI值和纳米粒浓度的增大而增强(P<0.05);纳米粒在56℃相变后可增大二维超声成像和增强超声成像的灰度值(P<0.05);SCC-15细胞膜周围及胞浆内部可见大量的靶向纳米粒附着,荧光模式下呈现明亮的绿光;流式细胞仪测量得出靶向纳米粒的靶向结合率为84.44%。结论:成功制备出载Fe3O4的靶向纳米粒,其形态规则,呈圆球形,大小较均匀一致,包封率较高,紫外-可见分光光度计检测出靶向纳米粒在300~840nm波长范围内出现了两个吸收波峰,具有良好的光学吸收性能,靶向纳米粒可定向到达舌鳞癌SCC-15细胞,具备超声和光声成像特点,拥有良好的多模态成像能力,可为后期建立诊断舌癌原发灶及淋巴结转移性鳞状细胞癌的程序和标准提供前期实验基础。
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