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目的观察不同剂量红花黄色素A(Safflor yellow A)对盲肠结扎穿孔(CLP)模型诱导的大鼠脓毒症时凝血功能的影响及血清中组织因子(tissue factor,TF)及组织因子途径抑制物(tissue factor pathway inhibitor,TFPI)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF)、白介素-1β(interleukin-1β)的变化。探讨不同剂量红花黄色素A(Safflor yellow A)对盲肠结扎穿孔(CLP)模型诱导的大鼠脓毒症早期凝血机能及炎症反应的作用,并观察肺部组织的变化,为脓毒症临床辅助治疗提供新的实验室依据。方法健康SD大鼠128只,雌雄不拘,采用随机数字表法随机分成6组:正常对照组、假手术组、手术组(模型组)、手术+红花黄色素注射液10 mg/kg-1组、手术+红花黄色素注射液40 mg/kg-1组、手术+红花黄色素注射液80mg/kg-1组,后5组再按处死时间分为手术后6h、12h、24h[3]三组,每组8只。红花黄色素A各组于CLP后立即经腹腔注射红花黄色素A(10、40、80mg/kg稀释至1ml),模型组给予等量生理盐水。1、正常对照组:不做任何处理,直接留取标本。2、假手术组:大鼠开腹后轻拉盲肠后将其回纳腹腔,逐层缝合腹壁。3、手术组(模型组):大鼠于腹正中开腹,在盲肠末端结扎,穿刺针贯通穿刺盲肠形成肠瘘,挤压盲肠使少量内容物溢出,回纳盲肠,逐层缝合腹壁切口,建立大鼠脓毒症模型。4、手术+红花黄色素A组:这组分别在CLP术后立即经腹腔给红花黄色素注射液10mg/kg-1、40 mg/kg-1 80mg/kg-1,每组24只。后各组按6h、12h、24h相应时间点经腹主动脉无菌采血,每组8只(n=8)。标本采集及处理观察各组大鼠一般状况,在造模后6h、12h、24h留取标本,凝血仪测定凝血功能;酶联免疫吸附测定(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)法检测血清TF、TFPI、TNF-α、IL-1β的含量;光镜下观察各组大鼠肺组织病理变化,进行比较。结果1、一般状态观察:正常组,假手术组大鼠呼吸均匀,精神状态良好,自主进食;CLP组大鼠精神萎靡,寒战,呼吸窘迫,口周发绀。CLP组内:12h组大鼠较6h组症状严重,且表现出四肢湿冷等,而24h组症状较12h组更重。CLP+红花黄色素A各剂量组大鼠也出现精神萎靡,呼吸窘迫等症状,但总体症状较CLP组表现轻微。CLP+红花黄色素A各剂量组之间比较:低剂量组较中剂量组症状较重,中剂量组较高剂量组症状区别不大,而同一剂量不同时间组之间比较:6h组症状较12h组、24h组重,12h组和24h组之间症状未进一步加重。2、PT的水平变化比较:研究发现CLP12h组、24h组与对照组,及相同时间的假手术组、红花黄色素A各个治疗组相比较,CLP组的PT明显延长(P〈0.05),而CLP6h组与相同时间各组比较无显著性差异(P>0.05);而红花黄色素A各个剂量组相同时间段之间两两比较PT无明显差异(P>0.05)。同一组别不同时间点之间两两比较:假手术组无明显差异;CLP组12h组较6h组、24h组明显延长(P<0.05),而CLP+红花黄色素A各个剂量组也无明显差异(P>0.05)。3、APTT的水平变化比较:CLP组各个时间段与对照组,假手术组,红花黄色素A各组相同时间段相比较APTT明显延长(P〈0.01)。而红花黄色素A组相同时间段之间APTT无明显差异(P>0.05)。而同一组别不同时间段之间两两比较:假手术组、CLP组、CLP+红花黄色素A组无明显差异(P>0.05)。4、血清中IL-1β的水平变化比较:CLP各组、红花黄色素A低剂量6h组,12h组相较于对照组IL-1β明显升高(P〈0.05)。红花黄色素A中、高组剂量各个时间点相较于同一时间的CLP组IL-1β明显下降(P〈0.05)。红花黄色素A不同剂量组同一时间段相较,IL-1β变化没有显著性差异(P>0.05)。而同一组别不同时间段之间两两比较:假手术组、手术组、CLP+红花黄色素A组无明显差异(P>0.05)。5、血清中TNF-α的水平变化比较:CLP6h组,12h组相较于对照组TNF-α明显升高(P〈0.05)。假手术各组与相同时间段手术组,红花黄色素A各个剂量组之间无显著性差异(P>0.05)。红花黄色素A不同剂量组与相同时间段的CLP组之间相较有显著性差异(P〈0.05),红花黄色素A不同剂量组的TNF-α有明显的下降。而红花黄色素A不同剂量组之间同一时间段的TNF-α相较没有显著性差异(P>0.05)。而同一组别不同时间段之间两两比较:假手术组、手术组无明显差异(P>0.05),CLP+红花黄色素A组同一剂量不同时间段发现24h组明显低于6h组(P<0.05),而12h组相较于其它两组无显著性差异(P>0.05)。6、血清中TF的水平变化比较:CLP组,假手术各组及红花黄色素A各个剂量6h组较对照组TF明显升高(P〈0.05)。红花黄色素A不同剂量组与同一时间的CLP组相较,TF下降明显(P〈0.05),但同一时间段的红花黄色素A不同剂量组相较无显著性变化(P>0.05)。而同一组别不同时间段之间两两比较:假手术组、手术组、CLP+红花黄色素A组无明显差异(P>0.05)。7、血清中TFPI的水平变化比较:所有组与对照组相比较TFPI升高明显(P〈0.05)。红花黄色素A不同剂量12h组、24h组与同一时间的CLP组相比较TFPI明显升高(P〈0.05)。而同一组别不同时间段之间两两比较:假手术组、手术组、CLP+红花黄色素A组均无明显差异(P>0.05)。8、肺组织大体观比较:观察肺组织表面大体形态,对照组及假手术组大鼠肺组织表面呈粉红色,无出血点;CLP各组肺组织体积明显增大,6h组可见点状的肺出血,12h组可见肺部弥漫性的出血点及明显肺水肿;24h组可见肺部弥漫性的出血点加重及肺水肿进一步加重,胸腔内积液增加。CLP+红花黄色素A各组大鼠肺组织水肿,可见局灶性点片状出血,较CLP各相同时间组程度均较轻。9、肺部病理片对照:对照组、假手术组大鼠肺组织结构清晰、完整,肺泡壁薄、光滑,肺泡间隔均匀一致。CLP6h、12h、24h组大鼠均可见肺组织水肿,部分肺泡壁增厚,肺泡隔及肺间质增宽,可见部分肺泡腔变窄或消失,肺间质中度水肿,炎症病变重度,肺泡腔及肺间质内见中度淤血。但随病变时间延长,肺病理损伤逐渐加重,到24h组时可见肺泡腔及肺间质内见重度淤血,炎症病变加重,肺组织重度水肿。CLP+红花黄色素各剂量组大鼠肺组织损伤较CLP相同时间组的减轻,肺组织水肿,部分肺泡壁的增厚,肺泡隔及肺间质病变及炎症病变均减轻明显。结论:红花黄色素A的应用可减缓大鼠脓毒症早期PT、APTT的延长,特别是对APTT的效果更明显。明显降低血清TF水平,使血清TFPI水平升高,下调炎症细胞因TNF-α,IL-1β水平,改善脓毒症时凝血功能障碍,减轻脓毒症时凝血与炎症的相互促进作用,减缓器官功能障碍综合征的发生,对脓毒症时肺的损伤组织有保护作用。说明红花黄色素A具有重建凝血抗凝平衡的作用,还具有降低炎性细胞因子的作用,因其安全、易获取的优点,可成为脓毒症早期治疗及缓解脓毒症时凝血功能紊乱的临床辅助药物。但药物剂量的大小之间比较上述作用无显著差异,表明小剂量的红花黄色素A就已经有明显治疗效果,不必加大剂量使用。