急性胰腺炎(acutepancreatitis,AP)是临床常见急腹症,具有起病急、病情重、变化快等特点,除了胰腺本身病变之外,还可能引起胰腺外器官和组织的损伤,甚至最终诱发全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)、多器官功能障碍综合征(multiple-organ dysfunction syndrome,MODS)等而导致死亡。尽管在过去的几十年里急性胰腺炎的研究取得明显进展,但是其发病机制仍较复杂。急性胰腺炎(acute pancreatitis,AP)无论病因如何,损伤的胰腺会引起胰酶的自身消化,同时作为炎症刺激物刺激单核巨噬细胞及胰腺腺泡细胞释放炎症介质和细胞因子,触发炎症介质形成瀑布样级联反应,最终会导致局部或全身炎症反应。CUEDC2(CUE domain-containing 2)是一种含有CUE结构域的多功能蛋白质,广泛在人类组织和器官中表达。大量研究表明,CUEDC2可以作用于多种细胞内信号转导通路,参与许多细胞活动,如细胞周期的调节,生长信号因子的转导、肿瘤的发生发展及炎症反应。目前研究发现CUEDC2不仅与肿瘤的发生发展密切相关,如乳腺癌、结肠炎相关性肿瘤、肺癌等,还可以参与炎症反应,如结肠炎等。关于CUEDC2与急性胰腺炎的炎症反应中的关系尚未有研究报道。本研究拟初步探讨CUEDC2在急性胰腺炎中的作用。目的:本研究通过雨蛙素诱导AR42J细胞建立急性胰腺炎细胞模型,并利用质粒转染技术过表达CUEDC2。监测细胞培养液中淀粉酶(amylase,AMY)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的水平,初步探讨CUEDC2对急性胰腺炎腺泡细胞TNF-α、IL-6的影响。方法:1应用雨蛙素诱导AR42J细胞建立急性胰腺炎细胞模型。2获得过表达CUEDC2的AR42J细胞:采用脂质体转染法将CUEDC2质粒转入AR42J细胞中,应用荧光显微镜查看转染效率。3实验分组:AR42J细胞分为4组:阴性质粒对照组(Neg-Control组)、阴性质粒雨蛙素组(Neg-CAE组)、CUEDC2质粒对照组(CUEDC2-Control组)、CUEDC2质粒雨蛙素组(CUEDC2-CAE组)。具体分组方法如下:阴性质粒组:应用阴性质粒转染AR42J细胞。Neg-CAE组给予10-7 mol/L雨蛙素,Neg-Control组给予等体积完全培养基,再将两组分为3个亚组:4h、8h、24h。CUEDC2质粒组:应用CUEDC2质粒转染AR42J细胞。CUEDC2-CAE组给予10-7mol/L雨蛙素 CUEDC2-Control组给予等体积完全培养基,再将两组分为3个亚组:4h、8 h、24h。4 CUEDC2 测定:PCR 检测 CUEDC2 mRNA 的表达。western-blot检测CUEDC2蛋白的表达。5淀粉酶、TNF-α、IL-6测定:应用淀粉酶试剂盒检测细胞上清中淀粉酶(amylase,AMY)水平,应用 ELISA(enzyme linked immunosorbent assay)方法检测细胞培养上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)水平。6统计学方法:应用SPSS 21.0软件包进行统计学处理,P<0.05认为具有统计学意义。结果:1成功建立了急性胰腺炎细胞模型,雨蛙素组AMY的水平随时间延长而增高且均较对照组升高(P<0.05)。雨蛙素组中CUEDC2mRNA水平较对照组下降(P<0.05)。雨蛙素组中各个时间点的CUEDC2mRNA无明显变化(P>0.05);2应用CUEDC2质粒转染细胞后,可见绿色荧光颗粒,细胞生长状态良好,表明转染条件稳定,细胞转染成功,转染率约为65%-70%。CUEDC2质粒组CUEDC2蛋白水平较对照组升高(P<0.05)。阴性质粒组与对照组相比未见明显差异(P>0.05);3细胞培养上清AMY:各个时间点比较,在阴性质粒对照组和CUEDC2质粒对照组中AMY水平未见明显上升,且两组之间未见明显差异(P>0.05);在各个时间点AMY水平,阴性质粒对照组和CUEDC2质粒对照之间无显著差异(P>0.05)。在阴性质粒雨蛙素组和CUEDC2质粒雨蛙素组中AMY水平随时间逐渐增高(P<0.05)。阴性质粒雨蛙素组与CUEDC2质粒雨蛙素组均较各自对照组升高(P<0.05);CUEDC2质粒雨蛙素组与阴性质粒雨蛙素组相比AMY水平下降(P<0.05);4细胞培养上清TNF-α、IL-6:在阴性质粒对照组和CUEDC2质粒对照组中各个时间点TNF-α、IL-6水平较低,且两组之间无统计学意义(P>0.05);在阴性质粒雨蛙素组和CUEDC2质粒雨蛙素组中随时间的延长TNF-α、IL-6水平逐渐升高(P<0.05)。阴性质粒雨蛙素组与CUEDC2质粒雨蛙素组在各个时间点TNF-α、IL-6水平均较各自对照组显著上升(P<0.05);CUEDC质粒雨蛙素组与阴性质粒雨蛙素组相比,在各个时间点TNF-α、IL-6水平均降低(P<0.05)。结论:1应用雨蛙素诱导可成功制备AP细胞模型。2在AP细胞模型中CUEDC2 mRNA的水平下调。3成功构建了过表达CUEDC2蛋白的AP细胞模型,为研究CEUDC2在急性胰腺炎中的作用奠定了基础。4过表达CUEDC2后,雨蛙素诱导的AR42J细胞产生AMY、TNF-α及IL-6水平降低,说明CUEDC2能抑制炎性介质的过度增长,在急性胰腺炎中其保护作用。