前言 肿瘤需要新生血管提供足够的营养和氧，运走代谢产物，为肿瘤的生长和转移创造有利条件。肿瘤血管生成是一包括血管内皮细胞(endothelial cell，EC)增殖、迁移及细胞外基质降解的复杂过程，与多种血管生成因子的刺激有关。其中血管内皮生长因子(vascular endothelium growth factor，VEGF)的作用最为重要。VEGF作用于细胞上两种特异的受体，即VEGF受体1(VEGFR-1，又称flt-1)和VEGF受体2(VEGFR-2，又称KDR或flk-1)而发挥其生物学作用。其中，KDR对血管发生和生长起关键作用。血管生成与肿瘤的预后有关，可能成为提示肿瘤转移和预后的重要指标，而微血管密度(microvessel density，MVD)是衡量血管生成的定量指标。本研究应用免疫组化法检测8例正常卵巢及56例卵巢上皮性浆液性肿瘤组织中VEGF、KDR的表达和MVD，分析VEGF、VEGFR-2(flk-1／KDR)的血管生成作用及其与卵巢浆液性癌(Ovarian Serous Carcinoma，OSC)临床病理生物学特征的关系，以探讨VEGF、KDR在OSC发生、发展和判断预后中的作用。 资料与方法 一、资料来源 收集2000年6月～2001年1月在中国医科大学第一、第二临床学院妇科住院患者手术切除的8例正常卵巢及56例卵巢上皮性浆液性肿瘤标本。新鲜组织标本常规10％甲醛固定，石蜡包埋。56例卵巢上皮性浆液性肿瘤包括卵巢良性浆液性肿瘤9例、卵巢交界性浆液性肿瘤9例对SC 38例。患者年龄21－70岁，平均 47．3岁。OSC按 FIGO（1986）标准分期，I期 7例、11期 5例。见期 25例、IV期二例。组织学分级 1级 6例＼11级 13例、皿级 19例。腹水量＞5皿InlZI例，腹水量＜500alll7例。伴有淋巴结转移者 16例。行淋巴结清扫术 29例。所有患者术前均未接受过化疗和放疗。全部病理组织切片均经两位有经验的病理医师盲法确定病理诊断及分级。 二、主要试剂 VEGF、KDR抗体购自美国 Stanta Cruz公司；CD。抗体及通用型免疫组化S－P试剂盒购自北京中山生物技术有限公司。 三、方法 1．免疫组化S－P法染色主要步骤：石蜡切片常规脱蜡至水，3％H尸。溶液消除内源性过氧化物酶，组织抗原电炉煮沸修复（拘檬酸盐缓冲液0．olmoUL，PH6．0，10min厂8％正常山羊血清室温封闭20min，滴加一抗，4℃孵育过夜，滴加通用型生物素标记二抗，置湿盒中，37℃孵育20drin，滴加辣根酶标记的链霉卵白素试剂，置湿盒中，37℃孵育20min。上述步骤之间均以PBS洗片3次。DAB显色剂显色，苏木素复染细胞核，封片。以PBS代替一抗作阴性对照，用已知VEGF、KDR及CD。阳性的肺癌切片为阳性对确。 2．结果判定： 2．IVEGF及KDR李定标准：VEGF及KDR多定标准为胞浆棕染程度。阴性（－X肿瘤细胞无着色；阳性（刁：着色弱或肿瘤细胞着色率＜50％；强阳性（＋十厂着色强或肿瘤细胞着色率 350％。 2．2 肿瘤MVD测定：切片经CD。染色后，在100倍光镜下挑选内皮细胞染色最多的区域，任何一个胞浆呈棕染的内皮细胞或内皮细胞簇，与周围组织有明显界限，无论有无管腔，均定义为一 ·2·个微血管，管腔较大且有较厚肌层或管腔内有8个以上的红细胞不在计数之列。在200倍光镜下计数5个视野的微血管数目，取其平均值，这种每高倍视野的血管数即为微血管密度。 2．3 统计学处理：采用SAS统计学软件包分析实验结果。对MVD的比较用t检验；VEGF不DR的表达率和各临床参数间的关系比较用四格表精确概率法。 结 果 1．VEGF人DR在卵巢上皮性浆液性肿瘤组织中的表达 正常卵巢VEGF、KDR的阳性表达率为口及12．5％，与卵巢良性浆液性肿瘤组织均为22．2％比较无显著性差异河＞0．05人卵巢交界性浆液性肿瘤组织VEGF、KDR的阳性表达率为44．4％。33．3％，高于正常卵巢（P＜O．05八卵巢良性浆液性肿瘤与卵巢交界性浆液性肿瘤组织比较无显著性差异冲＞0．05入0％＊＊＊F。KDR阳性表达率为 92．1％在4．二％，均明显高于正常卵巢k巢良性及交界性浆液性肿瘤（均为P＜O对门。 2．VEGF术DR表达与（EC临床病理生物学特征的关系 皿、w期 OSC KDR阳性表达率为 96．2％，明显高于 I、fi期OSC 58．3％（P＜O．01），而＊＊＊F阳性表达率分别为96．2％。83．3呢，经比较无显著性差异河＞0．05X组织学分级为1级osCVEGF阳性表达率66．7％，明显低于厂级OSC mo％（P＜O．OS）；皿级 OSC VEGF阳性表达率为94．7％，与 1级 OSC及厂级 OSC之间比较均无显著性差异（均为P＞O．05八I级OSC＊＊R阳性表达率为33．3％，均明显低f n级 OSC 92．3％、皿级 OSC 94．7％（均为P＜0．05hH级、且级0％之间比较无显著性差异（P＞0．05 ）。OSC淋巴结转移组 VEGF、KDR阳性表达均为 100％，均高于无淋巴结转移组84．6助＊9．2助（均为P＜0．05人腹水量＞ ·3·500Inl组 OSC VEGF、KDR阳性表达率均为 100％，均高于腹水量＜扣O