能量代谢对Balb/c 3T3成纤维细胞水通道蛋白AQP1表达的影响

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目的水的跨膜转运对维持细胞的正常代谢具有重要作用。水通道蛋白(Aquaporins, AQPs)作为水选择性通道家族,在体内扮演着重要角色。其中AQP1是发现最早研究最多的水通道蛋白,参与渗透压驱动下的水的转运,介导药理作用和参与水肿的形成等。它在肾脏、肺、脑,和眼均有表达,其调节机制是复杂的。本实验应用微管蛋白抑制剂诺考达唑(Nocodazole)、磷酸肌酸激酶抑制剂碘乙酰胺(Iodacetamide)和呼吸链抑制剂分别作用于Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞并观察AQP1的表达量的变化,探讨能量代谢对AQP1的影响。方法采用体外培养的Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞株。微管蛋白抑制剂诺考达唑(Nocodazole)、磷酸肌酸激酶抑制剂碘乙酰胺(Iodacetamide)和呼吸链抑制剂:一氧化氮(Nitric oxide)、抗霉素A (Antimycin A)、叠氮化钠(Sodium azide)分别作用于该细胞,应用Western blotting分别检测细胞在0小时、4小时、6小时及0小时、2小时、4小时、6小时、8小时AQP1的表达.结果诺考达唑、碘乙酰胺、一氧化氮、抗霉素A与细胞作用4小时后可见细胞变圆、体积增大;6小时后细胞核增大、细胞溶解坏死。sodium azide与细胞作用后光镜下观察细胞形态无明显改变。免疫印迹结果显示,Nocodazole和Iodacetamide与细胞作用4小时后,AQP1表达开始增加,至6小时时AQP1表达大量增加;并且具有浓度依赖性。叠氮化钠与细胞作用2小时后,AQP1表达增加;4小时后AQP1表达量达到高峰;6小时后AQP1表达开始逐渐下降.Nitric oxide和AntimycinA作用于细胞后AQP1的表达量均无明显改变。结论微管蛋白抑制剂诺考达唑(Nocodazole)、磷酸肌酸激酶抑制剂碘乙酰胺(Iodacetamide)和呼吸链抑制剂均可诱导Balb/c 3T3小鼠成纤维细胞AQP1的大量表达,表明AQP1的表达具有能量依赖性。
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