亚低温对心肺复苏后大鼠大脑皮质与海马组织Nrf2及HO-1表达的影响

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目的:1.明确亚低温治疗对心肺复苏后大鼠大脑皮质及海马中Nrf2及HO-1表达的影响并探讨可能的作用机制;2.探讨亚低温脑保护最佳的介入时机。方法:采用窒息法复制大鼠心肺复苏模型。将40只SD大鼠随机分为对照组(n=4)和模型组(n=36),模型组分为常温复苏组(n=12)和亚低温复苏组(n=24),亚低温复苏组又分为自主循环恢复前低温组(n=12)和自主循环恢复后低温组(n=12)。常温复苏组体温维持在37.5~39℃,低温组采用表面冰袋降温法使大鼠中心体温维持在32~34℃。各组分别于自主循环恢复后15min、30min、60min三个时间点取脑皮质和海马组织。采用逆转录聚合酶链反应方法(RT-PCR)分别检测皮质和海马组织Nrf2及HO-1mRNA的表达;HE染色法观察组织形态学变化;免疫组织化学法(IHC)检测Nrf2及HO-1蛋白表达。结果:1. HE染色法观察组织形态变化:1)模型组与对照组相比,海马正常神经元明显减少,神经元皱缩,胞体变小,胞核固缩变小,核仁消失,胞体形态各异,着色较深,神经元、神经胶质细胞与周围间隙增宽;2)亚低温复苏组与常温复苏组相比,组织病理形态明显改善:海马区域的神经元排列较紧密,层次较清晰,神经元结构较完整,神经元、神经胶质细胞与周围间隙增宽程度减小,神经细胞的胞核固缩也不明显,未见明显的变性、萎缩;3)自主循环恢复前亚低温组与自主循环恢复后亚低温组相比,组织病理形态未见明显改变,两组组织病理形态相似;2. RT-PCR检测Nrf2及HO-1mRNA表达:1)各模型组Nrf2及HO-1mRNA表达与对照组比较,差别均有统计学意义(p<0.05),模型组表达高于对照组;2)自主循环恢复后15min、30min、60min组Nrf2及HO-1mRNA的表达与对照组比较,表达高于对照组;3)常温复苏组Nrf2及HO-1mRNA表达与亚低温复苏组比较,差别有统计学意义(p<0.05),亚低温组的表达高于常温复苏组;4)自主循环恢复前低温组Nrf2及HO-1mRNA表达与自主循环恢复后低温组比较,差别无统计学意义(p>0.05);5)自主循环恢复后15min、30min、60min这三个时间点Nrf2及HO-1mRNA的表达,差别无统计学意义(p>0.05);3.免疫组织化学法(IHC)检测Nrf2及HO-1蛋白表达:1)各模型组Nrf2及HO-1蛋白表达与对照组比较,差别均有统计学意义(p<0.05),模型组表达高于对照组;2)自主循环恢复后15min、30min、60min组Nrf2及HO-1蛋白的表达与对照组比较,表达高于对照组;3)常温复苏组Nrf2及HO-1蛋白表达与亚低温复苏组比较,差别有统计学意义(p<0.05),亚低温组的表达高于常温复苏组;4)自主循环恢复前低温组Nrf2及HO-1蛋白表达与自主循环恢复后低温组比较,差别无统计学意义(p>0.05);5)自主循环恢复后15min、30min、60min这三个时间点Nrf2及HO-1蛋白的表达,差别无统计学意义(p>0.05)。结论:1.大脑皮质及海马中Nrf2及HO-1在心肺复苏后自主循环恢复的早期即有表达增加,自主循环恢复后15min、30min、60min这三个时间点表达均有增加;2.亚低温干预后,心肺复苏后大脑皮质及海马组织病理结构有明显改善:海马区域的神经元排列较紧密,层次较清晰,神经元结构较完整,神经元、神经胶质细胞与周围间隙增宽程度减小,神经细胞的胞核固缩也不明显,未见明显的变性、萎缩;3.亚低温干预上调大脑皮质及海马中Nrf2及HO-1mRNA及蛋白表达;4.亚低温干预可能是通过激活Nrf2-ARE信号通路,上调Nrf2及其下游基因HO-1表达从而发挥对中枢神经的保护作用。
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