论文部分内容阅读
目的: (1)观察转染pGCsiRNA-VEGF前后对 VEGF基因在胆管癌细胞QBC939中表达的影响。 (2)探究转染pGCsiRNA-VEGF对胆管癌细胞 QBC939的作用及其可能的机制为胆管癌基因治疗提供新的理论及实验依据。 方法: 通过细胞转染将质粒pGCsiRNA-VEGF转入胆管癌细胞QBC939;细胞活性测定实验(MTT法)检测转染pGCsiRNA-VEGF后QBC939细胞生存率的变化;流式细胞术检测转染pGCsiRNA-VEGF后QBC939细胞凋亡情况;划痕实验检测转染 pGCsiRNA-VEGF后细胞侵袭能力的变化;PCR技术检测相关基因在mRNA水平的表达;并应用蛋白质印迹实验(Western Blot)检测转染目的质粒后QBC939细胞VEGF、MMP2和MMP9等相关蛋白的表达。 结果: 本实验成功转染pGCsiRNA-VEGF至胆管癌细胞QBC939;QBC939细胞中检测到VEGF基因及蛋白的表达,转染pGCsiRNA-VEGF后,QBC939中VEGF基因及蛋白水平表达显著降低;MTT结果显示与mock及control组相比,VEGF组QBC939细胞的生存率确有抑制作用;细胞划痕实验结果证实了质粒pGCsiRNA-VEGF有减弱QBC939细胞迁移能力的作用;流式细胞术结果证明了质粒pGCsiRNA-VEGF对QBC939细胞有促进凋亡的作用;PCR及Western blot结果显示质粒抑制了VEGF,MMP2,MMP9的表达。 结论: 本研究成功转染质粒pGCsiRNA-VEGF,获得体外沉默VEGF的QBC939细胞模型,实验证明在体外沉默VEGF可以影响细胞生存率、抑制细胞迁移,其机制可能与促进细胞凋亡并抑制MMP2及MMP9表达有关。本研究结果为胆管癌基因治疗提供新的理论及实验依据。