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第一部分大鼠视网膜缺血再灌注损伤模型的建立及细胞凋亡的检测目的:采用前房高压灌注方法建立RIR损伤模型,并检测视网膜细胞凋亡的情况。方法:72只SD大鼠随机分为对照组和RIR损伤组。RIR组分别包括6个亚组即再灌注后3h、6h、12h、24h、72h、和7d,每亚组6只,采用前房高压灌注法(110mmHg×60min)建立大鼠RIR损伤模型。应用尼氏染色观察视网膜组织形态学改变,应用核酸末端转移酶介导的dUTP末端标记法(TUNEL)原位检测视网膜凋亡细胞。结果:1、在大鼠前房高压灌注建模过程中,可以清楚观察到模型动物发生视网膜缺血-血液复流征象。2、RIR后视网膜组织形态学改变:尼氏染色结果显示RIR后6h、12h内丛状层出现水肿及空泡形成,24h可见核固缩;RIR后7d视网膜内丛状层则明显变薄;与正常对照组比较有统计学意义(P＜0.01)。3、视网膜细胞凋亡情况:对照组视网膜在各时间点偶见TUNEL阳性细胞;与对照组比较:RIR组于再灌注后6h、12h、24h和、72h视网膜TUNEL阳性细胞显著性增多(P＜0.01),72h时则明显减少;而7d时,TUNEL阳性细胞极少见。TUNEL阳性细胞主要位于视网膜神经节细胞层和内核层,外核层均未见TUNEL阳性细胞。结论:采用升高眼压(110mmHg×60min)的方法能成功建立伴视网膜细胞凋亡的RIR损伤模型。第二部分PAP1基因在大鼠视网膜RIR中表达目的:了解PAP1基因在大鼠视网膜的表达情况及RIR损伤后PAP1基因表达的变化方法:120只SD大鼠随机分为对照组和RIR组,分别包括6个亚组即再灌注后3h、6h、24h、72h及7d组,每组10只。RT-PCR方法及原位杂交方法检测PAP1基因在正常视网膜中的表达及RIR后表达的变化。结果:1、PAP1基因大鼠视网膜组织中有表达;其表达部位主要在视网膜节细胞层和内核层。2、与正常对照组相比,RIR组PAP1-mRNA的表达在RIR损伤后3h表达增加(P＜0.01);RIR损伤后6h、12h、24h其表达明显减少,至24h达最低值(P＜0.01);RIR损伤后72h、7d组其表达增加(P＜0.01)。3、原位杂交法观察显示:与对照组比较,PAP1基因在RIR损伤后3h表达增加(P＜0.01);RIR后6h、12h、24h其表达明显减少,;RIR.后72h、7d其表达又开始增加(P＜0.01);其表达部位主要在视网膜神经节细胞层和内核层。结论:1、PAP1基因在大鼠视网膜组织中有表达。2、RIR损伤后PAP1基因的表达有变化。第三部分RIR损伤后PAP1基因表达与细胞凋亡目的:探讨RIR损伤后PAP1基因表达的变化与所致细胞凋亡的关系,以期进一步了解RIR损伤致细胞凋亡的可能机制。方法:采用前房高压灌注(110mmHg×60min)建立大鼠RIR损伤模型。1.48只SD大鼠随机分为对照组和RIR组,分别包括6个亚组即再灌注后3h、6h、12h、24h、72h和7d每亚组4只,用TUNEL法原位检测视网膜细胞凋亡情况。2.60只SD大鼠随机分为对照组和RIR组,RIR组同样分为6个亚组即再灌注后3h、6h、12h、24h、72h、7d,每亚组5只,用半定量RT-PCR方法检测PAP1-mRNA的表达水平。结果:1、与对照组相比较:RIR损伤后3h,视网膜TUNEL阳性细胞无明显变化(P＞0.05),RIR损伤后6h、12h、24h、72h视网膜TUNEL阳性细胞明显增加(P＜0.01)。RIR后7d时TUNEL阳性细胞极少见(P＞0.05)。2、与对照组相比较:PAP1-mRNA的表达在RIR后3h有所增加(P＜0.01)而RIR损伤6h、12h、24h则明显减少;RIR损伤后72h、7d时又开始增加(P＜0.01)。3、PAP1基因表达与细胞凋亡之间呈负相关(r=-0.679,P＜0.01)。结论:PAP1基因在RIR损伤致细胞凋亡过程中可能具有保护性作用。