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第一部分两头尖总皂苷部位提取最佳工艺研究及制备目的确定两头尖总皂苷部位提取最佳工艺,为后续药理实验提供所需实验药品。方法采用竹节香附素A为对照品,以香草醛-冰醋酸法测定药材中总皂苷的含量,以两头尖总皂苷的提取率为指标,对回流、超声和微波三种提取方法进行比较,并采取正交实验法对提取工艺进行改进,确定3个因素,即乙醇浓度(A)、提取时间(B)及溶媒比(C),每因素设计3个水平,用L9(34)正交表进行实验。结果回流、超声和微波三种提取方法的总皂苷提取率分别为2.30%、2.39%、3.69%。方差分析结果表明,A因素选1水平,B因素,C因素对结果变化无显著性影响。结论确定两头尖总皂苷最佳提取方法为,首先乙醚脱脂,接着乙醇微波提取,确定最佳条件为60%乙醇,10倍量,微波提取8min,30s为一个间隔；最后通过水饱和正丁醇萃取法进一步精制。本次实验用两头尖总皂苷得率为2.66%。第二部分两头尖抗猪血清免疫大鼠肝纤维化模型的作用及机理研究目的观察两头尖原药及两头尖提取物对猪血清免疫诱导的肝纤维化模型大鼠的治疗作用,旨在从组织病理、HSC活化、细胞因子、细胞外基质变化等方面考察其疗效并进而探讨其作用机制。方法SD大鼠68只随机分为5组,即空白组、模型组、扶正化瘀组(以下简称扶正组)、两头尖原药组(以下简称原药组)、两头尖提取物组(以下简称提取组)。采用猪血清腹腔注射法制备大鼠肝纤维化模型,0.5ml/只,每周2次,连续注射15周。第15周模型成功后,开始灌胃给药,扶正组给予扶正化瘀胶囊(15.8g·kg-1),原药组给予两头尖煎液(0.7g·kg-1),提取物给予两头尖提取物(0.071g·kg-1),模型组与空白组灌服等量生理盐水,日一次,疗程8周。实验过程中,定期称重并记录,观察记录动物行为学特征,记录死亡情况。大鼠于第23周末处死取材,分光光度法测定血清ALT.AST.ALB.SOD.MDA含量与肝组织中羟脯氨酸(Hyp)含量。ELISA法检测血清中MMP-9含量；放免法检测血清中HA.LN. PCⅢ.CIV含量；HE染色与Masson法检测肝组织病理；免疫组化法(SABC法)测定肝组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA).转化生长因子-β1,(TGF-β1)表达；RT-PCR技术测定肝组织中基质金属蛋白抑制酶-1(TIMP-1)mRNA表达。结果与模型组相比,扶正组、原药组、提取物组可显著改善大鼠一般身体状况,且体重变化有显著差异(P<0.05)；HE染色与masson染色结果证实,模型组大鼠肝组织正常肝小叶结构完全被破坏,肝索排列紊乱,在汇管区和肝小叶内有大量纤维结缔组织增生沉积,增多的胶原纤维形成线条状纤维间隔,可见假小叶形成。部分肝细胞出现萎缩、肿胀变性,甚至点状坏死,汇管区扩大,炎性细胞及坏死细胞增多。与模型组相比,扶正组、提取组、原药组炎症活动度、纤维化程度显著减轻(P<0.05)。免疫组化结果表明,模型组肝组织Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β1多呈高水平表达,染色呈深褐色,面积弥漫；扶正组、原药组、提取组表达面积和强度较模型组明显为弱,纤维间隔染色淡,无典型假小叶形成。显色指数结果表明,与模型组相比,扶正组、提取组、原药组肝组织中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β1的表达均明显减少(P<0.05),且原药组α-SMA表达轻于扶正组(P<0.05)。模型组血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CⅣ、MDA含量与肝组织Hyp含量明显升高(P<0.05),血清A1b、SOD、MMP-9含量明显降低(P<0.05)。与模型组相比,除提取组LN,扶正组与提取组血清SOD含量差异无显著性外,扶正组、原药组、提取组血清ALT、AST、HA、LN、PCⅢ、CⅣ、MDA含量与肝组织Hyp含量下降(P<0.05),Alb、SOD、MMP-9含量升高(P<0.05)。肝组织中TIMP-1mRNA表达结果表明,模型组肝组织中TIMP-1mRNA表达增高(P<0.05)；与模型组相比,提取组肝组织中TIMP-1mRNA表达降低(P<0.05)。结论采用猪血清免疫法可成功制备肝纤维化大鼠模型,两头尖原药及其提取物具有良好的抗肝纤维化作用,且提取物抗肝纤维化作用基本等同于两头尖原药。推测其作用机制为：①抑制肝星状细胞活化；②抑制ECM合成并促进ECM降解；③抑制促纤维化细胞因子表达；④保护肝细胞、减轻肝脏炎症；⑤抗脂质过氧化损伤第三部分两头尖含药血清对人肝星状细胞LX-2增殖及Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β1表达的影响目的观察两头尖含药血清对人肝星状细胞增殖的影响并进而探讨其作用机理。方法MTT比色法观测两头尖含药血清对人肝星状细胞LX-2增殖的影响；应用细胞免疫组化法观察两头尖对人肝星状细胞中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA、TGF-β1表达的影响。结果无论是两头尖原药或是两头尖提取物含药血清均对人肝星状细胞增殖具有抑制作用,随着浓度的增加,对LX-2增值的抑制作用也呈现逐渐增强的趋势。细胞免疫组化法结果显示,两头尖提取物含药血清可显著降低人肝星状细胞LX-2中Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、α-SMA的表达。结论两头尖含药血清对人肝星状细胞增殖具有抑制作用,推测其体外抗肝纤维化的机制与抑制肝星状细胞活化、抑制ECM合成并促进ECM降解相关。